呋喃丹對(duì)斑馬魚(Danio rerio)的生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究.pdf

1、呋喃丹是一種高毒的氨基甲酸酯類農(nóng)藥，能夠引起大鼠附睪、精囊、前列腺等器官重量降低，蚯蚓幼蟲孵化數(shù)減少、精子畸形、受精能力喪失等一系列生殖損傷。為了確定呋喃丹對(duì)魚類的生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng)，本文選用斑馬魚作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，檢測(cè)了肝臟卵黃原蛋白(Vitellogenin，VTG)、整魚性激素17β-雌二醇(17β-estradiol，E2)、睪酮(testosterone，T)含量、VTG基因、性腺芳香化酶基因CYP19a1a及雌激素受體(estr

2、ogen receptors，ERs)、雄激素受體(androgen receptor，AR)基因表達(dá)水平等多個(gè)指標(biāo)，探討了呋喃丹對(duì)雌性和雄性斑馬魚的生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng)及機(jī)制。
　　本文研究結(jié)果表明:
　　(1)0.1、1.0、10.0、100.0μg/L呋喃丹暴露雄性斑馬魚21天后，采用雙抗夾心ELISA法(Enzyme linked immunosorbent assay--sandwich technique)檢測(cè)肝臟

3、VTG含量，放射免疫分析法(Radioimmunoassay，RIA)檢測(cè)了整魚性激素含量，實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)了肝臟VTG、性腺芳香化酶基因CYP19a1a、肝臟和性腺雌激素受體基因基因表達(dá)水平。結(jié)果表明:0.1μg/L處理組VTG含量上升，所有呋喃丹處理組肝臟VTG基因表達(dá)量均升高;1.0、10.0、100.0μg/L處理組E2含量顯著上升，T含量顯著下降;而各處理組性腺CYP19a1a基因表達(dá)量較對(duì)照組均無顯著性變化;所有

4、處理組肝臟ERβ2及性腺ERα、ERβ1、ERβ2的表達(dá)水平顯著上調(diào)。表明呋喃丹可升高雄魚E2含量，上調(diào)雌激素受體ERs基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)雄性斑馬魚產(chǎn)生VTG，發(fā)揮雌激素效應(yīng)。而雄魚E2含量顯著升高和T含量顯著降低并不是由于呋喃丹影響CYP19a1a基因表達(dá)所致。呋喃丹暴露對(duì)性成熟雄性斑馬魚的性腺指數(shù)(gonadosomatic index，GSI)無顯著性影響。
　　(2)0.1、1.0、10.0、100.0μg/L呋喃丹暴露

5、雌性斑馬魚21天后，采用RIA檢測(cè)了整魚性激素含量，實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)了性腺芳香化酶基因CYP19a1a、肝臟雌激素受體基因、性腺雄激素受體AR及肝臟VTG基因表達(dá)水平，雙抗夾心ELISA法檢測(cè)肝臟VTG含量。所得結(jié)果與雄性斑馬魚存在差異:在雌魚體內(nèi)，E2和T含量均顯著降低，表明呋喃丹在雌性斑馬魚體內(nèi)不僅不能表現(xiàn)雌激素效應(yīng)，反而表現(xiàn)出潛在的抗雌激素效應(yīng);但是各處理組性腺CYP19a1a和肝臟ERs基因表達(dá)量較對(duì)照組均無顯著性變

6、化;而雌性斑馬魚性腺AR基因表達(dá)水平卻顯著上調(diào)。因此呋喃丹對(duì)雌性斑馬魚潛在的抗雌激素效應(yīng)尚需深入的研究。此外，1.0、10.0、100.0μg/L處理組VTG含量顯著降低，而最低濃度肝臟VTG基因的表達(dá)量升高，其他處理組外無顯著性變化。呋喃丹暴露對(duì)性成熟雌性斑馬魚的GSI也無顯著性影響。
　　綜上所述，本文研究顯示呋喃丹對(duì)雄性斑馬魚具有類雌激素效應(yīng)，而對(duì)雌性斑馬魚具有潛在的抗雌激素效應(yīng)，其生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng)在成熟的雌雄斑馬魚間存在