UVC照射誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡過程中TIAR蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、在本研究中，首先檢測了UVC照射對HeLa細(xì)胞中TIAR的蛋白質(zhì)表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)定位的影響，結(jié)果證實(shí)TIAR的蛋白質(zhì)表達(dá)水平?jīng)]有顯著變化，但是UVC照射可以誘導(dǎo)TIAR部分地出核?！　榱搜芯縏IAR的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與細(xì)胞內(nèi)定位的關(guān)系，構(gòu)建了TIAR全長、N端及C端的EGFP融合蛋白表達(dá)載體并進(jìn)行瞬式轉(zhuǎn)染，發(fā)現(xiàn)EGFP-TIARFL在細(xì)胞內(nèi)的分布與細(xì)胞免疫熒光的結(jié)果一致，即：正常情況下濃集于細(xì)胞核，中或高劑量UVC照射后部分的出核；E

2、GFP-TIARM123均勻的分布于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，在高劑量UVC照射時(shí)幾乎全部出核。　　還對過表達(dá)TIAR缺失體的HeLa細(xì)胞進(jìn)行UVC照射，檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定過表達(dá)EGFP-TIARRRM123抑制UVC照射誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡；而過表達(dá)EGFP-TIARQ-rich則促進(jìn)UVC照射誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡。另外通過流式細(xì)胞儀對細(xì)胞周期分布進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過表達(dá)EGFP-TIARFL及EGFP-TIARRRM12

3、3促進(jìn)細(xì)胞從G1向S及G2/M期的轉(zhuǎn)換，但是當(dāng)UVC照射后卻反而抑制細(xì)胞從G1向S及G2/M期轉(zhuǎn)換；而過表達(dá)C端Q-rich結(jié)構(gòu)域則對細(xì)胞周期沒有顯著影響，UVC照射后的細(xì)胞周期變化也與轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞相同。　　以上的研究結(jié)果表明：1)TIAR通過細(xì)胞內(nèi)定位的改變而非蛋白質(zhì)表達(dá)量的改變來參與UVC照射引起的細(xì)胞凋亡等效應(yīng)；2)C端Q-rich結(jié)構(gòu)域?qū)τ赥IAR在正常情況下濃集于細(xì)胞核是必需的，并且妨礙UVC照射引起的TIAR的出核；3