活性維生素D3對(duì)UUO模型大鼠腎間質(zhì)單核巨噬細(xì)胞抑制作用的研究.pdf

1、目的：選用大鼠單側(cè)輸尿管梗阻(unilateralureteral obstruction，UUO)-腎間質(zhì)纖維化模型，觀察1，25-(OH)2D3對(duì)腎組織中單核巨噬細(xì)胞(ED-1陽(yáng)性細(xì)胞)浸潤(rùn)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)基因和蛋白水平表達(dá)及血清TNF-α水平的影響，從單核巨噬細(xì)胞角度探討活性維生素D3在腎間質(zhì)纖維化中的保護(hù)作用和可能機(jī)制。
　　方

2、法：
　　1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
　　將50只清潔級(jí)雄性SD大鼠，隨機(jī)分為五組(每組10只)：①UUO+1，25(OH)2D3高劑量治療組；②UUO+1，25(OH)2D3低劑量治療組；③UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組；④UUO空白對(duì)照組；⑤假手術(shù)組。給藥方法：術(shù)后第一天給藥，每天給藥1次，UUO+1，25(OH)2D3高、低劑量治療組分別按6ng/100g體重、3ng/100g體重給藥，將骨化三醇溶于橄欖油，1ml灌胃/次，同時(shí)給予1

3、ml生理鹽水灌胃；UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組給予鹽酸貝那普利片0.17mg/100g溶于生理鹽水1ml灌胃，同時(shí)給予1ml橄欖油灌胃；UUO空白對(duì)照組僅行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，UUO空白對(duì)照組與假手術(shù)組均給予1ml橄欖油和1ml生理鹽水灌胃。于術(shù)后第28天處死大鼠，取血清和左側(cè)腎臟留做標(biāo)本。
　　2觀察、檢測(cè)指標(biāo)
　　2.1觀察1，25(OH)2D對(duì)模型大鼠腎間質(zhì)纖維化病理影響：①肉眼觀察腎臟大體病理變化；②天狼猩紅染色觀察腎間

4、質(zhì)纖維化病理變化。
　　2.2采用免疫組化法觀察梗阻側(cè)腎臟單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況。
　　2.3血清中TNF-α水平檢測(cè)：腹主動(dòng)脈取血，分離血清，采用ELISA法檢測(cè)。
　　2.4 RT-PCR和Western blot法檢測(cè)MCP-1、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。數(shù)據(jù)資料用(X±SD)表示。
　　結(jié)果：
　　1實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織中膠原沉積(CVF)的情況
　　假手術(shù)組大鼠腎間質(zhì)中

5、可見(jiàn)少量膠原沉積，UUO空白對(duì)照組腎間質(zhì)中膠原沉積明顯增多，其CVF值與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3高、低劑量治療組膠原沉積量明顯低于UUO空白對(duì)照組(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3高、低劑量治療組與UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組的膠原沉積量，兩兩比較，差異物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎臟單核巨噬細(xì)胞(ED-1陽(yáng)性細(xì)胞)浸潤(rùn)情況
　　假手術(shù)組

6、大鼠腎組織間質(zhì)中偶見(jiàn)ED-1陽(yáng)性細(xì)胞；UUO空白對(duì)照組腎間質(zhì)中ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)，主要見(jiàn)于腎間質(zhì)，呈灶性或彌漫性分布；UUO+1，25(OH)2D3高、低治療組ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較UUO空白對(duì)照組有明顯減少(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3高劑量治療組與UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組ED-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　3各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清TNF-α水平的變化
　　UU

7、O空白對(duì)照組術(shù)后大鼠血清中TNF-α濃度水平，較假手術(shù)組有明顯增高(P<0.05)，各治療組及陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清TNF-α濃度水平較UUO空白對(duì)照組有明顯降低(P<0.05)。UUO+1，25(OH)2D3高劑量治療組與UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組血清TNF-α濃度水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎臟MCP-1、MMP-9、TIMP-1 mRNA水平的表達(dá)
　　4.1 MCP-1、TIMP-1：UUO空白

8、對(duì)照組MCP-1、TIMP-1 mRNA的表達(dá)呈高表達(dá)，與假手術(shù)組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3治療組及UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組MCP-1、TIMP-1mRNA的表達(dá)明顯被抑制，與UUO空白對(duì)照組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.2 MMP-9：UUO+1，25(OH)2D3高、低治療組及UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組MMP-9 mRNA的表達(dá)明顯高于UUO空白對(duì)照組相比(P<

9、0.05)，假手術(shù)組MMP-9 mRNA的表達(dá)，與UUO空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　假手術(shù)組MCP-1、MMP-9、TIMP-1 mRNA有基礎(chǔ)量的表達(dá)，UUO+1，25(OH)2D3高劑量治療組與UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組MCP-1、MMP-9、TIMP-1 mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　5各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎臟MCP-1、MMP-9、TIMP-1蛋白水平的表達(dá)
　　5.1

10、MCP-1、TIMP-1：UUO空白對(duì)照組大鼠腎組織中MCP-1、TIMP-1的蛋白呈高表達(dá)，與假手術(shù)組相比明顯增高(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3治療組及UUO+貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組MCP-1、TIMP-1的蛋白表達(dá)較UUO空白對(duì)照組明顯降低(P<0.05)。
　　5.2 MMP-9：UUO空白對(duì)照組大鼠腎組織中MMP-9的蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)，UUO+1，25(OH)2D3治療組及UUO+貝那

11、普利陽(yáng)性對(duì)照組MMP-9的蛋白表達(dá)高于UUO空白對(duì)照組(P<0.05)。
　　1，25(OH)2D3對(duì)腎組織中MCP-1、MMP-9、TIMP-1蛋白表達(dá)的作用與貝那普利相似，兩組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，假手術(shù)組大鼠腎組織中MCP-1、MMP-9、TIMP-1的蛋白有基礎(chǔ)量表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　11，25-(OH)2D3可以抑制UUO大鼠纖維化腎組織MCP-1表達(dá)和單核巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化。

12、　　21，25-(OH)2D3可以降低UUO大鼠血清TNF-α水平，減輕TNF-α介導(dǎo)的炎性作用對(duì)腎組織的損害，從而發(fā)揮對(duì)腎臟的保護(hù)作用。
　　31，25-(OH)2D3可以上調(diào)UUO術(shù)后大鼠腎組織中MMP-9 mRNA和蛋白的表達(dá)，降低TIMP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)，調(diào)節(jié)腎間質(zhì)MMP-9/TIMP-1的平衡，進(jìn)而促進(jìn)ECM的降解，減輕腎間質(zhì)纖維化。
　　41，25-(OH)2D3具有與貝那普利相似的抑制腎間質(zhì)纖維化作用