活性維生素D3對(duì)UUO大鼠腎組織中ILK表達(dá)的影響.pdf

1、目的：動(dòng)態(tài)觀察活性維生素D3對(duì)腎間質(zhì)纖維化過程中ILK、TGF-β1、E-鈣粘素表達(dá)的影響，探討活性維生素D3對(duì)UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及其機(jī)制。
　　方法：雄性清潔級(jí)SD大鼠96只，6周齡，體重180～220g，普通喂養(yǎng)，隨機(jī)分4組：正常對(duì)照組24只，假手術(shù)組24只、單側(cè)輸尿管（UUO）梗阻大鼠模型組24只、活性維生素D3干預(yù)組24只，UUO模型是指行開腹手術(shù)后，游離左側(cè)輸尿管，在靠近左腎下極處結(jié)扎輸尿管,UUO模型組、活性

2、維生素D3干預(yù)組建立UUO動(dòng)物模型；假手術(shù)組是指行開腹手術(shù)，僅游離左側(cè)輸尿管，不結(jié)扎；對(duì)照組不做特殊處理；干預(yù)組是在大鼠UUO模型建立后當(dāng)天，將活性維生素D30.5ug溶于1ml花生油中灌胃，每天一次直至14天，正常對(duì)照組、模型組及假手術(shù)組給予每天1ml花生油灌胃。手術(shù)后第1天、3天、7天、14天天各處死6只大鼠，各組大鼠處死后均取左側(cè)腎臟，腎組織分為兩份，一份于10％甲醛溶液固定，一份于液氮中儲(chǔ)藏。腎組織經(jīng)HE以及Masson染色后在

3、光鏡下觀察腎小管間質(zhì)損害及腎間質(zhì)纖維化并進(jìn)行病理分級(jí)，計(jì)算積分平均數(shù)。免疫組化檢測腎組織中ILK、TGF-β1、E-鈣粘素的表達(dá)陽性細(xì)胞的面積及染色強(qiáng)度，計(jì)算各組平均積分值，并分析ILK、TGF-β1、E-鈣粘素的表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化的相關(guān)性。RT-PCR方法在分子水平檢測梗阻側(cè)腎組織中ILKmRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:HE染色及Masson染色結(jié)果：與對(duì)照組、假手術(shù)組比較，模型組腎間質(zhì)明顯增寬，纖維化明顯，炎細(xì)胞明顯增多；與U

4、UO模型組相比，維生素D3干預(yù)組腎間質(zhì)增寬不明顯，纖維化程度弱，炎細(xì)胞數(shù)量少，病理積分差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），與對(duì)照組比較，假手術(shù)組炎細(xì)胞增多，病理損害加重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；免疫組化結(jié)果：與對(duì)照組相比，UUO模型組ILK陽性表達(dá)面積顯著增加（P<0.01）；TGF-β1表達(dá)增加（P<0.05），E-鈣粘素表達(dá)減少（P<0.05），與UUO模型組比較，維生素D3干預(yù)組ILK表達(dá)減少（P<0.05），TGF-β

5、1表達(dá)減少（P<0.05）；E-鈣粘素表達(dá)增加（P<0.05），ILK在腎小管間質(zhì)中的表達(dá)增加，病理損傷程度與ILK呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.960p<0.01）；E-ca在小管間質(zhì)中的表達(dá)逐漸減少，病理損傷程度與E-ca呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.833p<0.01）；TGF-β1在小管間質(zhì)中的表達(dá)逐漸增加，病理損傷程度與TGF-β呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.806p<0.01）。RT-PCR結(jié)果:與對(duì)照組相比，UUO模型組ILKmRNA水平表達(dá)顯