活性維生素D3對(duì)腎間質(zhì)纖維化的影響及其機(jī)制研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、背景:
  慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease,CKD)已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康并消耗大量衛(wèi)生資源的常見慢性疾病。CKD是一個(gè)進(jìn)展性的疾病,而腎纖維化是CKD進(jìn)展到終末期腎病(End-Stage Renal Disease,ESRD)的關(guān)鍵途徑。腎纖維化是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程,其本質(zhì)是成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)成分(Extracellular Matrix,ECM)的過度堆積,從而導(dǎo)致腎小球纖維化和腎

2、間質(zhì)纖維化,其發(fā)生機(jī)制十分的復(fù)雜。轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)[1-4]和上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞化(Epithelial to MesenchymalTransition,EMT)[5-8]在腎間質(zhì)纖維化中發(fā)揮重要作用。探尋合適藥物對(duì)上述機(jī)制進(jìn)行有效干預(yù)具有重要意義。近年來一些研究顯示,活性維生素D3除了調(diào)節(jié)鈣、磷代謝等作用,還具有調(diào)節(jié)控制細(xì)胞生長、抗炎、抗纖維化等作用。而進(jìn)一步

3、觀察活性維生素D3對(duì)體外腎小管上皮細(xì)胞的影響,發(fā)現(xiàn)活性維生素D3能夠改善由PTH、白蛋白等誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,提示我們維生素D3可能具有改善腎間質(zhì)纖維化的潛能[9-10], UUO(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型是一種成熟的RIF模型[11]。本課題組旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討活性維生素D3對(duì)腎間質(zhì)纖維化的影響及相關(guān)機(jī)制,希冀為CKD的治療提供有益的指導(dǎo)。
  目的:
  

4、通過單側(cè)輸尿管結(jié)扎的方法建立UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化模型,探討活性維生素D3對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化模型腎臟病變的影響及相關(guān)機(jī)制。
  方法:
  采用左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)制備SD大鼠UUO模型;將40只SD大鼠隨機(jī)分成A組(假手術(shù)組)、B組(UUO模型組)、C組(UUO+小劑量維生素D3組)、D組(UUO+大劑量維生素D3組),每組10只;A、B組術(shù)后當(dāng)日起均給予花生油0.3ml腹腔注射,每日一次;C組術(shù)后當(dāng)日起給予活性維生素D3(0

5、.03ug/kg·d)與花生油配制成0.3ml藥劑腹腔注射,每日一次。D組術(shù)后當(dāng)日起給予活性維生素D3(0.06ug/kg·d)與花生油配制成0.3ml藥劑腹腔注射,每日一次。術(shù)后14天處死大鼠,采集血標(biāo)本、腎組織;檢測(cè)血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清鈣離子濃度、血清磷濃度。用雙抗體夾心親和素生物素酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)(avidinbiotincomplex enzyme linked immunosorbent

6、assay, ABC-ELISA)法測(cè)定血清甲狀旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH);蘇木精伊紅(Hematoxylin Eosin, HE)、Masson染色觀察腎組織病理改變,腎小管損傷,并進(jìn)行腎間質(zhì)纖維化程度的半定量分析;用免疫組化技術(shù)測(cè)定腎臟組織TGF-β、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),E鈣黏連蛋白(E-cadherin)表達(dá)情況。
  結(jié)果:
 

7、 1、各組大鼠均未有大鼠死亡
  2、與A組大鼠相比,B組血肌酐水平顯著升高(43.1±5.55umol/l VS28.0±5.68umol/1,P<0.05),血鈣水平顯著降低(2.44±0.15 VS2.58±0.05,P<0.05);兩組間甲狀旁腺激素、血磷水平無顯著性差異(P>0.05);與B組相比,C組血肌酐水平顯著降低(39.0±1.83umol/1 VS43.1±5.55umol/1,P<0.05),血鈣水平顯著升高

8、(2.75±0.08 VS2.44±0.15,P<0.05),兩組間甲狀旁腺激素、血磷水平無顯著性差異(P>0.05);與B組相比,D組血肌酐水平顯著降低(36.0±2.11umol/1VS43.1±5.55umol/l,P<0.05),血鈣水平顯著升高(2.78±0.14 VS2.44±0.15,P<0.05)血磷水平顯著升高(2.930±0.30mmol/1 VS2.50±0.31mmol/l,P<0.05),甲狀旁腺素顯著降低(0

9、.132±0.015mmol/1VS0.142±0.016mmol/1,P<0.05),與C組相比,D組血肌酐水平顯著降低(36.0±2.11umol/1VS39.0±1.83umol/l,P<0.05),血磷水平顯著升高(2.93±0.30mmol/1 VS2.54±0.23mmol/1,P<0.05),甲狀旁腺素顯著降低(0.132±0.015mmol/1 VS0.135±0.016mmol/l,P<0.05)兩組間血鈣無顯著性差異

10、(P>0.05);
  3、光鏡下,A組大鼠腎臟病理腎小球、腎小管及腎間質(zhì)未見明顯病變。B組大鼠腎臟病理全視野可見腎小管上皮細(xì)胞萎縮、管腔明顯擴(kuò)張、間質(zhì)顯著增寬,間質(zhì)可見大量單核細(xì)胞浸潤、纖維組織增生,多數(shù)腎小管基底膜完全性喪失,腎損傷指數(shù)、腎纖維化半定量指數(shù)較A組均有顯著上升(P<0.01);C組大鼠腎臟病理組織絕大部分視野均可見腎小管上皮細(xì)胞萎縮、管腔擴(kuò)張、間質(zhì)增寬,腎小管基底膜多表現(xiàn)為不規(guī)則改變,間質(zhì)可見單核細(xì)胞浸潤,部分視

11、野腎間質(zhì)、小管損傷不明顯,纖維組織無明顯增生,腎纖維化半定量指數(shù)較B組明顯下降(P<0.05);D組大鼠腎臟病理組織可見腎小管擴(kuò)張,間質(zhì)區(qū)可見少量的纖維組織增生,腎損傷指數(shù)、腎纖維化半定量指數(shù)較B、C兩組均明顯下降(P<0.05);
  4、腎臟組織TGF-β免疫組化結(jié)果顯示:四組大鼠腎臟的腎小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)、腎間質(zhì)細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞均可見代表TGF-β的棕黃色顆粒,且以B組染色最深;與A組相比,B組TGF-β平均光密度明顯增加

12、(0.32±0.04Vs0.21±0.04,P<0.05);與B組相比,C組TGF-β平均光密度顯著減少(0.26±0.03 Vs0.32±0.04 P<0.05);與B組相比,D組TGF-β平均光密度顯著減少(0.25±0.03Vs0.32±0.04 P<0.05)。C、D組間TGF-β平均光密度無顯著差異(P>0.05);
  5、腎臟組織α-SMA免疫組化結(jié)果顯示:四組大鼠腎臟的腎小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)、腎間質(zhì)細(xì)胞,可見代表α-S

13、MA的棕黃色顆粒,且以B組染色最深;與A組相比,B組α-SMA平均光密度明顯增加(0.24±0.02 Vs0.03±0.003,P<0.05);與B組相比,C組α-SMA平均光密度顯著減少(0.22±0.02 Vs0.24±0.02,P<0.05);與B組相比,D組α-SMA平均光密度顯著減少(0.20±0.03Vs0.24±0.02, P<0.05),C、D組間α-SMA平均光密度無顯著差異(P>0.05);
  6、腎臟組織E

14、-cadherin免疫組化結(jié)果顯示:四組大鼠腎臟的腎小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)、腎間質(zhì)細(xì)胞、腎小球系膜細(xì)胞均可見代表E-cadherin的棕黃色顆粒,且以B組染色最淺。與A組相比,B組E-cadherin平均光密度明顯減少(0.22±0.07 Vs0.45±0.06,P<0.05);與B組相比,C組E-cadherin平均光密度顯著增加(0.30±0.08Vs0.22±0.07,P<0.05);與B組相比,D組E-cadherin平均光密度顯著增

15、加(0.34±0.11Vs0.22±0.07,P<0.05)C、 D組間E-cadherin平均光密度無顯著差異(P>0.05);
  7.相關(guān)性分析顯示腎間質(zhì)纖維化半定量指數(shù)與TGF-β表達(dá)、α-SMA表達(dá)呈正相關(guān),與E-cadherin表達(dá)負(fù)相關(guān)。TGF-β表達(dá)與α-SMA表達(dá)正相關(guān),與E-cadherin表達(dá)負(fù)相關(guān)。α-SMA表達(dá)與E-cadherin表達(dá)負(fù)相關(guān)。
  結(jié)論:
  本文在以左側(cè)輸尿管結(jié)扎方式成功建

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