硒蛋白W抗氧化功能及其在雞缺硒性骨骼肌細胞凋亡作用中的研究.pdf

1、硒是人和動物所必需的一種微量元素之一。日糧硒缺乏能夠引起一系列缺硒性疾病的發(fā)生。骨骼肌損傷是雞缺硒性疾病中的典型病理變化。近年來有研究表明，硒的生物學(xué)功能主要是通過硒蛋白來發(fā)揮的，所以在缺硒性疾病的研究中，探討硒對硒蛋白水平的調(diào)節(jié)具有重要的作用。有研究指出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的硒蛋白如Sepn1、Selt、Selk及Sels等，以及SelW在肌肉的氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)、鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)、肌肉發(fā)育等方面具有重要的作用。且日糧硒的變化能夠引起多種硒蛋白表達的改變，

2、所以研究缺硒對硒蛋白的影響，及硒蛋白表達與缺硒性肌病間的關(guān)系就顯得十分重要。
　　 與哺乳動物的同源序列相比較，雞SelW具有自身的結(jié)構(gòu)特點。雞SelW與小鼠SelW間有32個氨基酸的差異。雖然雞SelW同樣具有10CXXU13結(jié)構(gòu)，但是其缺少Cys37。已有研究證明Cys37對于小鼠的抗氧化功能是必須的。是否這些結(jié)構(gòu)的差異影響了雞SelW的抗氧化功能還不清楚。本實驗通過復(fù)制缺硒雞模型，檢測雞胸肌、腿肌、翅肌中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位硒蛋白S

3、epn1、Selt、Selk、Sels、Sepsecs、Sephs1的表達情況，肌肉中氧化應(yīng)激的水平，凋亡的發(fā)生，同時分析硒蛋白與氧化損傷間的相互關(guān)系，探討缺硒性肌病中硒蛋白與氧化損傷間的關(guān)系;利用 RNAi技術(shù)，特異性敲除雞SelW基因，并用NAC和H2O2處理細胞，檢測成肌細胞細胞活力、ROS的生成、凋亡基因表達水平及凋亡率，探討雞SelW的抗氧化功能。實驗結(jié)果表明:
　　 1.缺硒導(dǎo)致腿肌、胸肌、翅肌發(fā)生不同程度的氧化損傷

4、，如Gpx活性降低、MDA含量升高等，而在胸肌中這些損傷程度比腿肌和翅肌中嚴重。通過進一步對肌肉中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位硒蛋白表達情況分析，證實缺硒引起肌肉損傷程度的不同與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的Sepn1、Selt、Selk、Sels的表達及Gpx活性的改變有關(guān)。
　　 2.分析Sepn1、Selt、Selk、Sels表達情況與Sepsecs和Sephs1的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)Sepn1、Sels、Selt在3種肌肉中與Sepsecs有明顯的相關(guān)性，但與Se

5、phs1均無相關(guān)性。表明在缺硒性肌病中，硒可能主要通過對Sepsecs的調(diào)節(jié)而影響硒蛋白的表達。
　　 3.缺硒及SelW敲除可引起骨骼肌細胞凋亡的發(fā)生，并誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因Bax、Caspase-3和p53表達的上調(diào)，Bcl-2蛋白表達下降，證實凋亡基因Bax、Bcl-2、Caspase-3及p53參與了缺硒及SelW敲除所誘導(dǎo)的骨骼肌細胞凋亡的過程。
　　 4.在SelW RNAi之后，利用不同濃度H2O2處理成肌細胞