乙肝病毒X蛋白及其截短體與損傷DNA結(jié)合蛋白1在HBV復(fù)制中的作用.pdf

1、背景：乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein，HBx)與損傷DNA結(jié)合蛋白1(damage-specific DNA binding protein1，DDB1)在乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)復(fù)制中發(fā)揮了重要作用。HBV基因組整合到宿主基因組過程中，HBx蛋白常常發(fā)生斷裂不全，轉(zhuǎn)錄為HBx蛋白的截短體，既往多項(xiàng)研究表明HBx蛋白截短體對HBV的復(fù)制產(chǎn)生了一定的影響，并且不同截短長

2、度、不同截短部位的截短體對HBV的復(fù)制產(chǎn)生的影響也不同。但是，HBx蛋白截短體是否通過影響DDB1水平來影響HBV復(fù)制至今尚無詳細(xì)報(bào)道。
　　目的：我們的研究將進(jìn)一步探討HBx蛋白及其兩個截短體(HBx1-101，HBx43-154)與DDB1在HBV復(fù)制中的作用。
　　方法：使用質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，分別提取轉(zhuǎn)染后72h細(xì)胞總RNA和細(xì)胞總蛋白，通過逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時定量PCR和Western blot分析方法分別在DDB

3、1基因的mRNA和蛋白水平觀察HBx蛋白及其截短體對DDB1蛋白的影響。并通過質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，提取轉(zhuǎn)染72h后各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞胞漿DNA，收集各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的培養(yǎng)上清液，通過實(shí)時定量PCR及ELISA方法檢測各組細(xì)胞HBV復(fù)制及病毒標(biāo)志物表達(dá)水平，從而觀察HBx蛋白及其兩個截短體與DDB1對HBV復(fù)制的影響。
　　結(jié)果：在有HBV復(fù)制的HepG2細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染了HBx C-端截短體HBx1-101的細(xì)胞中DDB1蛋白的

4、表達(dá)水平明顯下降，且不能使缺失HBx蛋白的HepG2細(xì)胞中HBV的復(fù)制及病毒標(biāo)志物表達(dá)恢復(fù)到野生型水平；而轉(zhuǎn)染N-端截短體HBx43-154的細(xì)胞中DDB1蛋白表達(dá)水平與轉(zhuǎn)染HBx的對照組相比無明顯變化，且能使缺失HBx蛋白的HepG2細(xì)胞中HBV的復(fù)制及病毒標(biāo)志物表達(dá)恢復(fù)到野生型水平。并且各轉(zhuǎn)染組DDB1蛋白水平變化與HBV復(fù)制水平相平行，即DDB1蛋白水平的降低，使得HBV復(fù)制水平也相應(yīng)降低。
　　結(jié)論：C-端53個氨基酸及D