乙肝病毒外膜大蛋白在乙型肝炎檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、目的: 目前，全球約有3.5億慢性HBV攜帶者，我國乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)陽性率為約9.75％，現(xiàn)該癥患者約2000多萬。每年死于乙型肝炎相關(guān)疾病者約27萬多人(23/10萬)。因此，建立一種簡便、靈敏、重復(fù)性好的HBV檢測(cè)方法具有十分重要的意義。目前臨床上使用的檢測(cè)乙肝病毒復(fù)制的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)各有各的臨床意義，但是，他們或缺乏特異性，或較難在基層醫(yī)院中普及、推廣。目前廣泛使用的抗乙肝病毒藥物雖有一定的治療效果，但尚無有

2、效合理的評(píng)價(jià)治療效果的指標(biāo)，無法確定停藥的時(shí)間，停藥后是否會(huì)復(fù)發(fā)(反彈)亦缺乏有效的預(yù)示指標(biāo)。因此，臨床迫切需要能夠有效評(píng)估預(yù)示病毒復(fù)制以及從血清HBeAg陰性的乙肝病毒感染者中發(fā)現(xiàn)處于活動(dòng)期的肝炎患者的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。 隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)和計(jì)算機(jī)等技術(shù)的迅速發(fā)展，新的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)—乙型肝炎病毒外膜大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein，LHBs)，已經(jīng)逐漸應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室診斷中

3、。但是目前尚無成熟的乙型肝炎病毒外膜大蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)用于臨床，本實(shí)驗(yàn)通過大量的臨床樣本驗(yàn)證了乙型肝炎病毒外膜大蛋白在檢測(cè)各類乙肝患者病毒復(fù)制方面的特異性，旨在為我國日趨嚴(yán)峻的乙型肝炎防治工作的改善奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法: 1、臨床標(biāo)本采集：用無菌靜脈采血針采集患者的靜脈血； 2、首先通過檢測(cè)乙肝五項(xiàng)確定乙型肝炎患者； 3、通過PCR檢測(cè)上述患者血清中的病毒復(fù)制量； 4、通過ELLISA檢測(cè)上

4、述患者血清中乙肝病毒大蛋白(乙肝病毒大蛋白前S抗原或者乙肝病毒Dane顆?？乖?的陰陽性； 5、通過大量臨床樣本檢測(cè)結(jié)果評(píng)估乙肝病毒大蛋白(乙肝病毒大蛋白前S抗原或者乙肝病毒Dane顆?？乖?陰陽性與乙肝病毒PCR結(jié)果的一致性。 結(jié)果: 1、LHBs的蛋白水平與HBV DNA拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值之間有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.932。方差分析顯示不同HBV DNA拷貝數(shù)組別之間，LHBs含量呈顯著性差異； 2

5、、乙型肝炎大三陽患者中LHBs的陽性率與HBV DNA的陽性率經(jīng)X2檢驗(yàn)沒有顯著性差異(P>0.05)； 3、乙型肝炎小三陽患者中HBV DNA的陽性檢出率為51.12％(181/354)；LHBs的陽性檢出率為55.65％(197/354)，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.81，P>0.05)； 4、本實(shí)驗(yàn)分別用HBV DNA和LHBs兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)對(duì)593份乙型肝炎患者(HBsAg陽性)血清進(jìn)行測(cè)定，查X2界值表

6、得P<0.005。按a=0.05水準(zhǔn)，可以認(rèn)為兩種方法的檢測(cè)結(jié)果相同。 綜上所述，大蛋白的檢出結(jié)果與HBV DNA的檢出結(jié)果無明顯差異。HBV DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值與LHBs表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.932，P<0.001)，HBV DNA拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值變化可以用LHBs OD值為變量的線性回歸模型來解釋 結(jié)論: 1、LHBs能夠反應(yīng)HBV的復(fù)制情況，血清中LHBs的含量與HBV DNA的拷貝數(shù)具有較好的相關(guān)性；