乙肝病毒對于肝癌細胞DNA雙鏈斷裂損傷后修復蛋白CtIP功能的影響.pdf

1、研究背景:原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,乙肝病毒(HBV)感染是導致其發(fā)生發(fā)展的常見誘因。DNA雙鏈斷裂損傷(DSBs)是導致腫瘤惡性發(fā)展的一個主要因素。研究顯示,HBV感染可以引起不同程度的DNA損傷,包括DSBs。抑癌蛋白CtIP在DSBs發(fā)生后再修復過程中發(fā)揮著至關重要的作用。關于HBV感染是否影響肝癌細胞在遭受DSBs后修復過程中抑癌蛋白CtIP蛋白的正常功能未見研究報道,有待于進一步的深入研究。
　　目的:研

2、究HBV感染對肝癌細胞DSBs修復過程中抑癌蛋白CtIP表達及功能的影響。
　　方法:選擇穩(wěn)定轉染HBV基因組的HepG2.2.15作為實驗組細胞株,選擇經典原發(fā)性肝癌HepG2作為對照組細胞株,分別給予低濃度抗腫瘤藥物博來霉素(BLM)處理誘導產生DSBs,利用Realtime-PCR與WesternBlot技術檢測DSBs發(fā)生后CtIP在RNA、總蛋白表達水平及磷酸化水平的改變。
　　結果:實驗結果表明(1)低濃度BLM

3、給藥24h后,DSBs金標準蛋白γ-H2AX表達顯著上升,證實BLM處理細胞株24h后DSBs發(fā)生(2)Realtime-PCR結果顯示:兩組肝癌細胞株在給藥處理后CtIPRNA表達均顯著上調;實驗組細胞株與對照組細胞株之間,給藥前及給藥后HepG2.2.15細胞株RNA表達均高于HepG2細胞株;P值<0.05(3)WesternBlot分別檢測給藥前及給藥后各個細胞株的CtIP總蛋白表達情況,結果顯示:同種細胞間,給藥處理后CtIP

4、總蛋白表達明顯上調;實驗組與對照組之間,給藥前及給藥后HepG2.2.15細胞株CtIP總蛋白表達量均明顯高于HepG2細胞株CtIP總蛋白表達量;P值<0.05(4)檢測給藥前和給藥后各個細胞株的絲氨酸位點磷酸化CtIP蛋白表達情況:給藥前各個細胞株,CtIP磷酸化蛋白基本不表達;給藥處理后,各個細胞株的CtIP磷酸化蛋白均顯著上調,而實驗組細胞株的CtIP磷酸化程度明顯低于對照組。
　　結論:肝癌細胞DNA雙鏈斷裂損傷后其關鍵