抗血管緊張素轉化酶降解的AcSDKP異構體的篩選和活性研究.pdf

1、目的：
　　AcSDKP是一個氮端乙酰化的內源性四肽，主要由它的前體物胸腺素β4經(jīng)由脯氨酰寡肽酶（POP）水解而釋放。在血液中的濃度一般為納摩爾級。AcSDKP是一種多功能性生理調控因子，具有多種生物學活性，如抑制心臟成纖維細胞增殖，造血干細胞生長等。然而，AcSDKP在體內能夠被血管緊張素轉化酶（ACE）降解,失去其結構和功能，從而為其臨床應用帶來困難。本課題擬通過對AcSDKP進行D型氨基酸的改構，獲得一種能夠不被ACE降解，

2、同時又保持其原有的抗纖維化生物學活性的AcSDKP異構體小肽，以期為AcSKDP在抗纖維化方面的應用提供理論和實驗基礎。
　　方法：
　　以D型氨基酸替代的方式構建AcSDKP異構體，采用Fmoc-固相合成AcSDKP異構體，并通過高效液相色譜（HPLC）進行純化。然后通過HPLC檢測異構體AcSDKP抗ACE降解的能力；MTT法和BrdU法檢測異構體AcSDKP對小鼠成纖維細胞（L929）和原代培養(yǎng)的心臟成纖維細胞增殖的影

3、響；流式細胞術檢測異構體AcSDKP對骨髓干細胞（BMSC）向巨噬細胞分化的影響。Westernblot方法檢測異構體AcSDKP對心臟成纖維細胞磷酸化Smad2蛋白（P-Smad2）表達的影響。構建SD大鼠肝纖維化模型，通過對肝臟組織切片HE染色觀察和血清中相關指標的生化檢測，研究AcSDKP異構體對肝纖維化的影響。
　　結果：
　　成功合成了AcSDKP以及三種異構體AcSDKP（AcSD(d)KP,AcSDK(d)P，

4、AcSD(d)K(d)P），純度均在98％以上。ACE降解實驗證實，而三種異構體AcSDKP均能夠抵抗ACE降解。AcSD(d)K(d)P對L929細胞和心臟成纖維細胞增殖均有抑制作用。AcSD(d)K(d)P能夠抑制BMSC向巨噬細胞分化。AcSD(d)K(d)P能抑制心臟成纖維細胞P-Smad2的表達。動物證實AcSD(d)K(d)P具備一定的抗肝纖維化活性，對肝臟有一定的保護作用。
　　結論：
　　成功構建了能夠抵抗A