ERCC1在腎透明細胞癌中的表達及其意義.pdf

1、目的:
　　隨著人們生活習性的改變及現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的提高，腎癌的檢出率逐年上升，如今已經(jīng)成為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。腎透明細胞癌(RCCC)是腎癌最為常見的病理類型[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)只有早期的RCCC(T1～2期)可以通過手術(shù)治療，并且遠期預后良好[3-5]，而晚期的RCCC(T3～4期)對藥物及手術(shù)的療效均較差，平均壽命僅有40個月，其5年的生存率在10％以下。因此研究出新的特異性高的腫瘤標記物，提高腎透明細胞癌初期的

2、診斷率，改善疾病預后，延長患者壽命，是我們科研工作者一直以來的奮斗目標。
　　核苷酸切除修復交叉互補基因1(ERCC1)是核苷酸外切除修復家族中重要成員之一，是一種相對高度保守的單鏈DNA核酸內(nèi)切酶，在DNA損傷修復和死亡過程當中發(fā)揮著緊要的作用，在人類染色體的19q13.2區(qū)域，相對分子量為15kD(1D=1U)。有研究表明，細胞之所以癌變，主要是因為DNA的損傷不能及時得到修復，最終導致染色體發(fā)生突變，細胞癌變。而Vineis

3、等[6]研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因是通過識別及修復損傷的DNA，保證基因完整性的方式參與癌癥的發(fā)生發(fā)展的，因此ERCC1作為修復損傷的一個關鍵基因受到人們的廣泛關注，現(xiàn)階段尚未發(fā)現(xiàn)有關于ERCC1在腎透明細胞癌中表達的研究。
　　本實驗通過免疫組織化學檢測及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應半定量分析，研究ERCC1在人腎透明細胞癌細胞株及正常腎組織中的表達情況，探究其在癌癥發(fā)生及發(fā)展中所產(chǎn)生的作用。
　　方法:
　　選取2013年11月

4、到2014年5月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院泌尿外科就診的50例腎透明細胞癌患者做為研究對象。其中男性占28例，女性占22例，年齡35～78歲，平均(54.40±9.56)歲。所有RCCC患者在手術(shù)治療前均沒有接受放、化療等干預措施。50例腎透明細胞癌組織標本做為病例組。再從該50例患者中隨機挑選20例，取距RCCC大于3cm的癌旁腎臟組織標本，做為正常對照組。將所有待測樣品均分為兩份，一份在4％的甲醛溶液中固定，然后用石蠟包被，最后切成厚度

5、大約為4μm的薄片待測。另一份置于液氮儲存?zhèn)溆?。按Fuhrman三級分類標準劃分RCCC的分化程度。
　　免疫組織化學方法檢測:應用免疫組織化學檢測，從蛋白水平對石蠟包埋的組織中的ERCC1進行檢測，其中腎透明細胞癌組織標本50例，正常腎組織標本20例。在光鏡下應用陽性表達細胞數(shù)比例和表達強度進行綜合的評分。用x2檢驗比較RCCC組和對照組中ERCC1的陽性表達率之間的差異。分析ERCC1與RCCC病理分級、患者年齡和性別的關系。

6、
　　反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應方法檢測:嚴格按照cDNA試劑盒的使用說明方法提取組織中的RNA，加入RT反應體系的管中，設置GAPDH基因片段為ERCC1基因表達的內(nèi)參照基因，在94℃恒溫變性3min的條件下進行PCR的擴增引物，取標本擴增出來的產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠為1％的含GV核酸染料，并以DNAMarker(DL2000)為其準則的片段標識，電泳后利用紫外透射儀觀察，結(jié)果以二者之積分吸光度的比值表示。兩組間的吸光度

7、比值采用t檢驗進行統(tǒng)計學的分析。
　　用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。把P＜0.05定為差別有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組織化學染色示:ERCC1在RCCC和正常對照組的腎組織中均有所表達，ERCC1在RCCC組中的陽性表達率為60％高于ERCC1在正常對照組中的陽性表達率25％(x2=7.000，P=0.008);ERCC1的表達在病理高分化組和中分化組大于低分化組(x2=8.680，P

8、=0.002)。ERCC1的表達與年齡無關(x2=1.330，P=0.227)。ERCC1蛋白的表達與性別無關(x2=1.640,P=0.187)。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:ERCC1在腎透明細胞癌的表達量為0.280±0.030，而在癌旁正常組織的表達量為0.104±0.011，差異有統(tǒng)計學意義(t=36.185，P=0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、ERCC1在腎透明細胞癌組織中的表達高于癌旁正常組織中的表