Dicer在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其功能學(xué)研究.pdf

1、目的:大量研究證實(shí)microRNA(miRNA)合成過(guò)程的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),然而這一過(guò)程在腎透明細(xì)胞癌中的作用還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在研究miRNA合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶Dicer在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其生物學(xué)作用,探討Dicer與腎透明細(xì)胞癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　方法:選取正常腎小管上皮細(xì)胞系HKC、非轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O、轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN以及42例腎透明細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本(其中14例已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)

2、移)和相應(yīng)癌旁正常腎組織,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和Westernblot法檢測(cè)Dicer在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株和組織中mRNA和蛋白水平的表達(dá),同時(shí)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Dicer在組織中的表達(dá)。應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列和對(duì)照DicerMock序列進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和ACHN,采用Westernblot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Dicer在細(xì)胞系中的沉默效率,并通過(guò)MTS法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增值率和細(xì)胞周期的變化,Tr

3、answell法檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:和正常腎小管上皮細(xì)胞系HKC相比,Dicer的表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和ACHN中均降低,而轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN比非轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O表達(dá)水平更低(p值均<0.05);和癌旁正常腎組織相比,Dicer的表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌組織中明顯降低,且已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌組織比未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腎透明細(xì)胞癌組織表達(dá)水平更低(p值均<0.

4、05),同時(shí)Dicer的mRNA水平與腎透明細(xì)胞癌的總TNM臨床分期呈顯著相關(guān)(p<0.05)。在786-O和ACHN細(xì)胞系的功能實(shí)驗(yàn)中,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染DicerMock序列組比較,MTS法顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的增值率明顯上升,流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的S期細(xì)胞比例明顯增加伴隨G0/G1細(xì)胞比例明顯減少,Transwell法顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增多(p值均