Dicer在腎透明細胞癌中的表達及其功能學(xué)研究.pdf

1、目的:大量研究證實microRNA(miRNA)合成過程的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),然而這一過程在腎透明細胞癌中的作用還未見報道。本實驗旨在研究miRNA合成過程中的關(guān)鍵酶Dicer在腎透明細胞癌中的表達及其生物學(xué)作用,探討Dicer與腎透明細胞癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　方法:選取正常腎小管上皮細胞系HKC、非轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系786-O、轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系A(chǔ)CHN以及42例腎透明細胞癌手術(shù)標本(其中14例已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)

2、移)和相應(yīng)癌旁正常腎組織,應(yīng)用實時定量PCR和Westernblot法檢測Dicer在腎透明細胞癌細胞株和組織中mRNA和蛋白水平的表達,同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測Dicer在組織中的表達。應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列和對照DicerMock序列進腎透明細胞癌細胞系786-O和ACHN,采用Westernblot法檢測轉(zhuǎn)染后Dicer在細胞系中的沉默效率,并通過MTS法和流式細胞儀檢測細胞增值率和細胞周期的變化,Tr

3、answell法檢測細胞遷移和侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:和正常腎小管上皮細胞系HKC相比,Dicer的表達水平在腎透明細胞癌細胞系786-O和ACHN中均降低,而轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系A(chǔ)CHN比非轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系786-O表達水平更低(p值均<0.05);和癌旁正常腎組織相比,Dicer的表達水平在腎透明細胞癌組織中明顯降低,且已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的腎透明細胞癌組織比未發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的腎透明細胞癌組織表達水平更低(p值均<0.

4、05),同時Dicer的mRNA水平與腎透明細胞癌的總TNM臨床分期呈顯著相關(guān)(p<0.05)。在786-O和ACHN細胞系的功能實驗中,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染DicerMock序列組比較,MTS法顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的增值率明顯上升,流式細胞儀檢測顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的S期細胞比例明顯增加伴隨G0/G1細胞比例明顯減少,Transwell法顯示轉(zhuǎn)染DicersiRNA序列組的遷移細胞數(shù)和侵襲細胞數(shù)明顯增多(p值均