?；撾[秘桿菌分離鑒定及毒力因子檢測.pdf

1、化膿隱秘桿菌是經(jīng)濟型家畜、禽以及野生哺乳動物、鳥類黏膜上的一種共生菌，也是造成這些動物感染的一種條件性致病菌，大部分分布在健康動物的乳房、泌尿生殖道、呼吸道和胃腸道黏膜。能導(dǎo)致多種動物多種器官的化膿性感染，造成子宮炎、腎膿腫、奶牛乳房炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎等疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。
　　 本研究從送檢病料分離出3株疑似化膿隱秘桿菌分離菌，并對其進行形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生化特性鑒定。對三株分離菌進行16SrRNA基因克隆、序

2、列分析。blast結(jié)果表明分離菌均為化膿隱秘桿菌。將上述結(jié)果與實驗室保存的兩株化膿隱秘桿菌(HLJ-0912、HLJ-1005)的16SrRNA基因序列比對分析，5株菌16SrRNA序列同源性為99.84％，與國內(nèi)其他實驗室6株化膿性奶牛子宮內(nèi)膜炎分離株的同源性為99.82％，與5株化膿性肺炎分離株的同源性為99.96％。三株新分離菌分別命名為HLJ-1204-F1、HLJ-1204-F3、HLJ-1204-G3。
　　 對實驗

3、室已有5株化膿隱秘桿菌進行毒力因子基因攜帶情況檢測，結(jié)果表明HLJ-1005株缺失CbpA，含有NanP、NanH，其余4株含有CbpA、NanH，不含有NanP。根據(jù)毒力基因檢測結(jié)果選取HLJ-1204-F1、HLJ-1204-F3和HLJ-1005株化膿隱秘桿菌以腹腔注射的方式感染小鼠，比較菌株之間毒力差異。設(shè)計引物對化膿隱秘桿菌毒力因子（CbpA、NanH、NanP）進行全基因克隆、測序及蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測。選取毒力差異明顯的HLJ-1

4、204-F1和HLJ-1005株進行毒力因子鑒定。同時制備HLJ-1204-F1、HLJ-1005株全菌體抗血清，并利用制備抗血清，對菌體吸附、侵入MDBK細胞作進一步研究。
　　 動物實驗結(jié)果顯示HLJ-1005株致病力弱于其他兩株分離菌。毒力因子全基因測序結(jié)果顯示NanH基因首尾存在較大突變;CbpA三維結(jié)構(gòu)近似于金黃色葡萄球菌CHA，NanH、NanP符合細菌唾液酸酶模式三維結(jié)構(gòu)。細胞吸附性實驗表明化膿隱秘桿菌可吸附于MD