林麝肺源致病性大腸桿菌的分離鑒定及毒力基因的檢測.pdf

1、林麝是國家一級保護動物，麝香具有較高的藥用價值。為保護和發(fā)展林麝資源，增加麝香產(chǎn)量，我國自1958年開始進行人工養(yǎng)殖林麝的研究，但是由于各種疾病和環(huán)境等因素的影響，養(yǎng)殖規(guī)模一直受到限制。尤其是大腸桿菌導致的林麝肺炎發(fā)病率及死亡率均較高，為林麝養(yǎng)殖業(yè)造成了很大的危害。2016年2月陜西寶雞某林麝養(yǎng)殖基地人工繁殖林麝突然發(fā)病，自行用青霉素、鏈霉素等藥物治療后效果不明顯并且出現(xiàn)死亡病例。對死亡林麝剖檢觀察，發(fā)現(xiàn)主要病變在肺臟。為確定導致林麝發(fā)

2、病的病原菌，從死亡林麝肺臟進行細菌分離，對分離所得細菌進行生化特性、耐藥性、致病性、16S rRNA序列分析以及毒力基因的檢測。主要獲得以下結(jié)果:
　　1.從林麝的病變組織中分離到2株細菌，菌株1和菌株2。在血平板上菌株1為表面光滑，半透明，直徑3mm左右的灰白色菌落，鏡檢呈革蘭氏陰性短桿菌，兩端鈍圓，成對或散在;菌株2為表面光滑，邊緣整齊，半透明，直徑1mm左右的灰白色菌落，鏡檢呈革蘭氏陰性桿菌，聚集成堆。
　　2.經(jīng)糖發(fā)

3、酵試驗（葡萄糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖）、M.R試驗、V-P試驗、靛基質(zhì)試驗、檸檬酸鹽利用試驗共5項生化試驗鑒定，根據(jù)《伯杰氏細菌鑒定手冊》判斷標準，可以確定分離所得菌株1和菌株2均為大腸桿菌。
　　3.對分離所得菌株進行16S rRNA序列測定，并與標準參考菌株進行序列比對分析。結(jié)果表明，兩株細菌的核苷酸序列與大腸桿菌核苷酸的同源性為100％，菌株1與Escherichia coli O104∶H4序列相似性較高、菌株2與Esc

4、herichia coli O78序列相似性較高。由此可將菌株1和菌株2確定為大腸桿菌。
　　4.用藥敏試驗檢測了兩株分離菌對抗生素的耐藥性，發(fā)現(xiàn)頭孢類（頭孢唑啉、頭孢曲松鈉）和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類（氨曲南）對2株林麝肺部致病性大腸桿菌均敏感;氨基糖苷類（鏈霉素）對其均中度敏感;對其他類別抗生素均呈現(xiàn)不同程度的耐藥性。將治療藥物由青霉素、鏈霉素改成頭孢曲松鈉和氨曲南后，效果較好。
　　5.致病性試驗結(jié)果顯示菌株1和菌株2均有較強

5、的毒性，腹腔注射72 h之后，試驗組小白鼠死亡率為75％。死亡小白鼠肺臟中可以分別分離到菌株1和菌株2。
　　6.毒力基因檢測試驗中，兩株分離菌株均檢出了ompA基因，其他的粘附素類(afa/draB、iha、sfa/focCD)、鐵轉(zhuǎn)運系統(tǒng)類(sitD ep.a、sitD chr.、iucD.a)、血清類(neuC)和毒素類(sat、vat)9種毒力基因均未檢出。
　　綜上所述，本研究中的病例是由于大腸桿菌引起的林麝肺炎，