寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌優(yōu)勢血清型和毒力基因檢測及耐藥性分析.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)，獸醫(yī)臨床上最常見的病原菌之一，可引起人和家畜禽的多種疾病，如引起幼畜嚴(yán)重腹瀉和敗血癥、豬水腫病、人的出血性結(jié)腸炎-溶血性尿毒綜合征、新生兒腦膜炎及腎炎等多種疾病。隨著養(yǎng)殖業(yè)的逐漸規(guī)模化，抗菌藥物的過度使用，導(dǎo)致大腸桿菌的耐藥性及其多重耐藥性已嚴(yán)重影響了獸醫(yī)臨床疾病的治療，因此對本地區(qū)奶牛乳房炎大腸桿菌進(jìn)行毒力基因檢測和耐藥性分析及耐藥性分子流行病學(xué)的調(diào)查，不但對大腸桿菌引起的疾

2、病防治具有指導(dǎo)意義，而且有利于控制耐藥菌株的產(chǎn)生和傳播。
　　本研究采用微生物學(xué)和分子生物學(xué)方法對寧夏地區(qū)部分奶牛場臨床型及隱性乳房炎奶樣，進(jìn)行大腸桿菌分離鑒定，應(yīng)用CLSI(2012)推薦的紙片擴(kuò)散法(K-B)對其進(jìn)行抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，采用O抗原平板凝集試驗(yàn)鑒定大腸桿菌優(yōu)勢血清型，運(yùn)用PCR擴(kuò)增方法對大腸桿菌毒力基因及耐藥基因進(jìn)行檢測。
　　1.2011～2013年采集寧夏地區(qū)部分奶牛場臨床型及隱性乳房炎奶樣，進(jìn)行大腸桿

3、菌的分離鑒定。通過觀察大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上細(xì)菌菌落形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢和PCR擴(kuò)增16SrDNA等方法進(jìn)行大腸桿菌的鑒定，最終分離鑒定出197株大腸桿菌。
　　2.根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)，選取38種大腸桿菌O抗原血清，對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進(jìn)行O抗原血清鑒定。鑒定結(jié)果顯示，共有138株大腸桿菌被鑒定出血清型，優(yōu)勢血清型有O127(35/138)、O158(16/138)和O44(12/138)，有6株為自凝，53株未定型。
　　

4、3.對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進(jìn)行16種常用抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，所分離的大腸桿菌對氨芐西林耐藥率最高，達(dá)到了54.69％，其次對多西環(huán)素(39.59％)、四環(huán)素(39.09％)和鏈霉素(38.58％)的耐藥率也較高。而對頭孢類、多粘菌素、氟苯尼考和喹諾酮類藥物則比較敏感，敏感率都在60％以上。分離株最多耐受15種抗菌藥物。
　　4.采用PCR方法對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進(jìn)行了毒力基因和耐藥基因的檢測，結(jié)果顯示，毒

5、力基因astA、eaeA、hlyA、escV和sepA以及耐藥基因tetB、tetC、GyrA、GyrB和ParC都被檢出。其中astA檢出率是21.13％，hlyA檢出率最低，只有1.02％。四環(huán)素類的2種耐藥基因tetC的陽性率為14.72％，tetB的陽性率是7.61％;氟喹諾酮類的GyrA、GyrB和ParC三種耐藥基因檢出率非常高，分別為97.46％、98.98％和98.48％。
　　綜上所述，本研究通過對寧夏地區(qū)奶牛乳