醋酸鉛對鯉魚卵巢上皮細(xì)胞毒性的研究.pdf

1、鉛是一種嚴(yán)重的金屬環(huán)境污染物,對于淡水魚類有一定的毒性影響。包括鉛在內(nèi)的許多重金屬可以進(jìn)入魚體內(nèi)并且通過食物鏈進(jìn)行甯集,從而擾亂魚類的正常活動,造成魚類中毒或者死亡,最終對人類的健康造成威脅。但是目前對于重金屬鉛造成的淡水魚類的中毒機(jī)制還不十分清楚。但它引起了廣泛的生物學(xué)和生物化學(xué)等影響,例如引起酶活性的抑制,DNA合成阻礙,突變,染色體畸形,腫瘤以及繁殖障礙等。
　　 為了探討鉛對淡水魚類的影響,本次實驗采用醋酸鉛染毒鯉魚卵巢

2、上皮細(xì)胞,并建立三個染毒劑量組:高劑齡組(200μM·L-1)、中劑量組(100μgM·L-1)、低劑量組(50μM·L-1)和空白對照組。采用24h、48h兩個時間組,應(yīng)用抗氧化物酶測定、脂質(zhì)過氧化物測定、TUNEL染色和Annexin V-FITC PI雙染色方法、PCR產(chǎn)物灰度分析,對細(xì)胞的氧化還原酶活性,細(xì)胞凋亡、細(xì)胞凋亡基因表達(dá),首次系統(tǒng)的從細(xì)胞水平、分子水平進(jìn)行鉛對鯉魚卵巢上皮細(xì)胞毒性的研究。研究結(jié)果顯示:
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3、隨著染毒劑量和時間的增加醋酸鉛可引起細(xì)胞的CAT、SOD、GPX、GR酶活性的抑制,各數(shù)據(jù)顯著低于對照組(P<0.05)。MDA水平升高,與對照組相比差異顯著(P<0.05)。結(jié)果表明醋酸鉛作用可引起機(jī)體氧化損傷。
　　 2采用MTT法檢測顯示醋酸鉛可引起鯉魚卵巢上皮細(xì)胞增殖抑制,并且隨著染毒劑量和時間的增加,其增殖抑制作用增強(qiáng)(P<0.05)；通過細(xì)胞形態(tài)觀察可看到顯并的凋亡特征,并且隨著劑量和時間的增加其特征越明顯。采用TU

4、NEL染色和Annexin V-FITC PI雙染色方法可以檢測到鯉魚卵巢上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡,并且隨著染毒劑量和時間的增加其細(xì)胞凋亡數(shù)目也隨之增加。結(jié)果表明醋酸鉛可抑制細(xì)胞增殖,并且引起細(xì)胞發(fā)生凋亡
　　 3醋酸鉗作用細(xì)胞后,通過RT-PCR的方法以及PCR產(chǎn)物灰度分析得出抑制凋亡基因Bcl-2的表達(dá)鼙與染毒劑量和時間呈現(xiàn)反向效應(yīng)關(guān)系,隨著染毒劑量和時間的增長,Bcl-2的表達(dá)量逐漸減少。結(jié)果表明:醋酸鉛作用可引起細(xì)胞凋亡基因Bc