醋酸鉛致大鼠腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷及死亡受體途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、鉛是一種對人體多個系統(tǒng)和器官具有毒性的重金屬元素，在體內(nèi)無任何生理功能，理想血液鉛的濃度為0。由于鉛在環(huán)境中可長期蓄積，不能降解，可以通過呼吸系統(tǒng)和消化器官進(jìn)入人體，99％從腎臟代謝，腎臟是鉛中毒的主要受損器官。
　　研究目的:本試驗(yàn)通過研究醋酸鉛導(dǎo)致大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK)的氧化損傷程度、細(xì)胞凋亡情況以及死亡受體通路在醋酸鉛致NRK細(xì)胞凋亡過程中的作用，旨在探討鉛對動物腎臟毒性的作用機(jī)制，為防治鉛中毒提供理論依據(jù)。
　

2、　研究方法:體外培養(yǎng)NRK細(xì)胞，于細(xì)胞對數(shù)生長期加入0，2，10和50μM的醋酸鉛作用24 h后，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖率，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活力，硫代巴比妥酸(TBA)法測定細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量，比色法檢測細(xì)胞中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，ABTS快速法測定細(xì)胞中的總抗氧化能力(T-Aoc)。用Hoechst33258和AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡，Western bl

3、ot檢測FAS、FASL及Caspase-8的蛋白表達(dá)量，流式細(xì)胞儀檢測Z-IETD-FMK對細(xì)胞凋亡的抑制作用。
　　結(jié)果:NRK細(xì)胞在37℃、5％ CO2環(huán)境下生長良好，24～72 h為細(xì)胞對數(shù)生長期。試驗(yàn)所選醋酸鉛濃度2、10、50μM均可通過降低SOD、 GSH-Px活性及細(xì)胞的總抗氧化能力，升高M(jìn)DA的含量而引起細(xì)胞的氧化損傷，并呈劑量-效應(yīng)相關(guān)性;可呈劑量依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。凋亡結(jié)果顯示醋酸鉛可通過死亡受體途徑誘導(dǎo)NR