醋酸鉛對體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細胞的毒性作用及凋亡機理的研究.pdf

1、隨著環(huán)境鉛污染和職業(yè)鉛暴露的日趨嚴重，鉛對人類和動物的生殖毒性倍受關(guān)注，但鉛的生殖毒性機制還不很清楚。睪丸間質(zhì)細胞作為生精細胞的支架，可為生精細胞提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)，能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白為生精細胞提供高濃度的雄激素環(huán)境，并具備一定的吞噬功能等，是體內(nèi)一種非常重要的雄性生殖細胞。因此，在本研究中，選用小鼠睪丸間質(zhì)細胞（TM3細胞）為研究對象，探討鉛對雄性動物生殖細胞的損傷作用及機制，為進一步研究開發(fā)新型鉛特效解毒藥提供試驗基礎(chǔ)和理論

2、依據(jù)，并為防治由重金屬引發(fā)的畜禽繁殖機能障礙提供新的切入點。
　　研究目的:以體外培養(yǎng)TM3細胞為模型，觀察堿式醋酸鉛對其凋亡的影響，進而探索凋亡死亡受體途徑的機制。
　　研究方法:體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質(zhì)細胞，胰酶消化傳代后，待細胞密度達到80％，將細胞分為四組，分別加入0，2，10，50μmol/L的醋酸鉛染毒TM3細胞，作用24 h后，采用MTT法檢測醋酸鉛對細胞增殖的影響;用氮藍四唑(NBT)顯色法檢測SOD活性變化，用

3、硫代巴比妥酸法測定細胞中MDA的含量，間接法檢測細胞中GSH-Px活力，ABTS法檢測總抗氧化能力即T-AOC; Hoechest33258和Annexin-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡;Westernblot檢測Caspase-8，F(xiàn)AS，F(xiàn)AS1蛋白含量，以及Caspase-8阻斷劑對細胞凋亡的抑制作用。
　　結(jié)果:TM3細胞在36℃、5％ CO2環(huán)境下生長良好，12-36 h為細胞對數(shù)生長期。醋酸鉛抑制TM3細胞增殖;試

4、驗所選濃度2，10，50μM醋酸鉛均顯著降低抗氧化酶SOD、GSH-Px活性以及總抗氧化能力T-AOC，升高MDA的含量從而引起細胞氧化損傷;研究表明醋酸鉛誘導(dǎo)細胞凋亡，最高細胞凋亡率可達33.87％，且通過死亡受體途徑的FAS/FAS-L途徑誘導(dǎo)TM3細胞凋亡。主要表現(xiàn)為:醋酸鉛組的FAS，F(xiàn)AS-L，Caspase-8蛋白含量與對照組相比顯著增多，以及Caspase-8抑制劑(C21H34N4O10)顯著抑制醋酸鉛所誘導(dǎo)的TM3細胞