基于微囊化豬肝細胞的生物人工肝治療食蟹猴急性肝衰竭的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一章 食蟹猴急性肝功能衰竭模型的建立及評價
　　目的:穩(wěn)定的、重復性好的大動物急性肝衰竭(ALF)模型是人工肝研究不可或缺的平臺。本章研究旨在建立一種藥物和外科食蟹猴ALF模型。
　　方法:1、16只食蟹猴隨機分為4組(A，B，C，D)，分別經外周靜脈注射0.30，0.25，0.20+0.05（間隔24 h），0.20 g/kg的D-氨基半乳糖(D-gal);給藥后觀察受試猴的臨床

2、表現，生存時間，生化、凝血、顱內壓(ICP)和肝臟的病理變化;2、6只食蟹猴行袖套式插管門靜脈-右腎靜脈轉流聯(lián)合膽總管結扎、切斷術(PRRS+CBDLT)，術后觀察動物的臨床表現，生化、凝血和肝臟的病理和組織學變化。
　　結果:1、給藥后受試猴均出現不同程度的精神萎靡，進食減少、黃疸等表現，生存時間ABC三組分別為56±8.7 h、95±5.5 h和99±2.2 h，D組除1只136h死亡外，其余猴全部存活。血清肝酶、TBiL、C

3、r、BUN、血Amm等明顯升高，ALB水平降低，PT明顯延長，ICP增高等，病理學鑒定有明顯肝細胞片狀壞死、伴出血。2、術后實驗猴血清AST、ALT、CK、LDH、ALP、TBiL、DBiL等明顯升高，PT明顯延長，ALB水平降低，術后第10天肝標本病理學和組織學檢測出明顯的肝細胞壞死、變性、凋亡等炎癥反應。
　　結論:成功構建了D-gal誘導的藥物性食蟹猴ALF模型和PRRS+CBDLT誘導的簡化外科食蟹猴ALF模型。
　

4、　第二章 基于微囊化豬肝細胞的生物人工肝安全性及有效性的評估
　　目的:以具有自主知識產權的往返翻轉灌注型生物反應器為核心，裝載微囊化的豬肝細胞，組建生物人工肝(BAL)，通過對食蟹猴ALF模型的救治實驗對其安全性和有效性進行評價，為其進一步臨床試驗奠定基礎。
　　方法:采用D-gal分次誘導建立食蟹猴藥物性ALF模型，離體膠原酶兩步灌流法分離西藏小型豬原代肝細胞，制備海藻酸鈉-聚賴氨酸(APA)裹肝細胞微囊，裝入往返翻轉灌

5、注型生物反應器中，構建BAL，用于ALF食蟹猴的治療。15只ALF食蟹猴隨機分為三組:(1) ALF組（空白對照）:模型猴僅觀察不治療;(2) BAL組:模型猴接受裝載微囊化豬肝細胞的BAL治療;(3) Sham組（設備對照）:模型猴接入BAL系統(tǒng)體外循環(huán)6小時，反應器內裝載不含細胞的APA空微囊。比較三組實驗猴治療前后的生存時間、生化指標、PT及ICP等變化。
　　結果:治療過程中實驗猴均耐受良好。與兩個對照組相比，BAL組受試