輸血相關(guān)病原體滅活及檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、背景：輸血是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不可或缺的重要支撐條件，但輸血也存在著一定的不良反應(yīng)，受血者遭遇輸血不良反應(yīng)的可能性稱(chēng)為輸血風(fēng)險(xiǎn)。輸血風(fēng)險(xiǎn)主要由免疫性輸血不良反應(yīng)和感染性輸血風(fēng)險(xiǎn)。特別是乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、艾滋病病毒(HIV)等病毒引起的輸血傳染病給受血者帶來(lái)的病痛尤為嚴(yán)重。如何降低乃至克服病毒性輸血風(fēng)險(xiǎn)，一直是輸血醫(yī)學(xué)研究的核心內(nèi)容之一。隨著社會(huì)的進(jìn)步和血液檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，輸血相關(guān)傳染性疾病的發(fā)生率雖然有了較大幅度地下

2、降，但由于HBV、HCV、HIV等病原體的檢測(cè)存在“窗口期”漏檢且西尼羅河病毒(WNV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、人白血病病毒(HTLV)人類(lèi)皰疹病毒(EB)等多種經(jīng)血傳播病毒未被檢測(cè)，故僅靠獻(xiàn)血者篩選和血液檢測(cè)并不能完全阻斷病毒通過(guò)輸血感染的途徑，杜絕病毒性傳染病的根本措施是對(duì)血液成分進(jìn)行病毒滅活。現(xiàn)已研發(fā)成功亞甲藍(lán)光化學(xué)法(Methylene bluephotochemical treatment，MBP)、補(bǔ)骨脂衍生物光化學(xué)法、核黃

3、素光化學(xué)法(Riboflavin photochemical treatment，RPT)等多種血液成分病毒滅活技術(shù)，其中亞甲藍(lán)光化學(xué)技術(shù)已在我國(guó)廣泛應(yīng)用于臨床用血漿的病毒滅活，近年核黃素光化學(xué)技術(shù)在歐洲被獲準(zhǔn)用于血漿和血小板病毒滅活。亦有個(gè)別報(bào)道將亞甲藍(lán)光化學(xué)方法用于治療乙型肝炎，使患者血液中HBV的病毒拷貝數(shù)大幅降低，病情得到控制，但這一療法的機(jī)理未明。迄今所進(jìn)行的血液成分病毒滅活研究多聚焦于病毒滅活技術(shù)的滅活機(jī)制、血液成分病毒滅活

4、的效果及方法學(xué)的探討。尚無(wú)經(jīng)光化學(xué)滅活后的病毒對(duì)機(jī)體免疫功能影響的相關(guān)研究報(bào)道。
　　 目的:本研究應(yīng)用亞甲藍(lán)、核黃素體外光化學(xué)病毒滅活方法處理HBV病毒顆粒，將滅活處理前后的HBV與人外周血淋巴細(xì)胞(PBMCs)共孵育，探討不同光化學(xué)處理對(duì)病毒免疫原性的影響。
　　 方法:將純化的含HBV顆粒的HepG2.2.15細(xì)胞上清進(jìn)行亞甲藍(lán)+可見(jiàn)光、核黃素+可見(jiàn)光進(jìn)行滅活處理，再分別與6份來(lái)自健康獻(xiàn)血者的人外周血淋巴細(xì)胞共孵育

5、，分別設(shè)為MB-HBV組和RB-HBV組。將純化的含HBV顆粒的HepG2.2.15細(xì)胞上清與淋巴細(xì)胞共孵育組設(shè)為HBV組，未處理的淋巴細(xì)胞組設(shè)為Untreated組。在0h、24h、72h收集上清液，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)HBsAg、HBeAg的變化；在24h應(yīng)用Real-Time PCR方法檢測(cè)PBMC中抗原遞呈細(xì)胞(Antigen-presenting Cell，APC)表面與T細(xì)胞活化相關(guān)的共刺激分子和細(xì)胞粘附分子的mRNA水平

6、的變化；在72h應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)PBMC分泌的細(xì)胞因子水平。
　　 結(jié)果: HBV經(jīng)亞甲藍(lán)光化學(xué)病毒滅活后HBsAg和HBeAg均無(wú)顯著變化(P>0.05)。與Untreated組相比，MB-HBV可使分泌量上調(diào)14±10倍，IFN-γ分泌量上調(diào)12±6倍，但I(xiàn)L-2、IL-4、IL-10的分泌量無(wú)上調(diào)作用。MB-HBV可顯著上調(diào)APC表面與T細(xì)胞活化相關(guān)的共刺激分子和細(xì)胞粘附分子的mRNA水平表達(dá)(P<0.05)。而HB

7、V經(jīng)核黃素光化學(xué)滅活處理后HBsAg無(wú)顯著性變化(P>0.05)，HBeAg檢測(cè)含量顯著降低(P<0.05)，RB-HBV組PBMCs中與T細(xì)胞活化相關(guān)的共刺激分子和細(xì)胞粘附分子的mRNA的表達(dá)水平無(wú)上調(diào)，且RB-HBV組對(duì)上述細(xì)胞因子的分泌量亦無(wú)上調(diào)作用。
　　 結(jié)論:HBV經(jīng)亞甲藍(lán)光化學(xué)滅活處理后可刺激PBMC分泌Th1型細(xì)胞因子(TNF-α和IFN-γ)，具有免疫調(diào)節(jié)作用。而HBV經(jīng)核黃素光化學(xué)滅活處理后喪失誘導(dǎo)細(xì)胞因子分