鄰苯二甲酸二乙基己基酯對(duì)大鼠肺損傷的影響.pdf

1、目的：1．觀(guān)察鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞的形態(tài)與功能的影響，探討DEHP對(duì)大鼠肺損傷的機(jī)制：
　　 2．進(jìn)一步探討DEHP與肺纖維化的關(guān)系。
　　 方法：1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組自然受孕的雌性SD大鼠(體重220-280g)24只分成四組：正常對(duì)照組(n=6)、低劑量組(n=6)、中劑量組(n=6)、高劑量組(n=6)。受孕后第1天開(kāi)始每天給母鼠灌胃，自然分娩后繼續(xù)灌胃直至子鼠出生后21d獲取所需的子

2、鼠標(biāo)本，子鼠均由母鼠哺乳喂養(yǎng)，并經(jīng)母鼠灌胃染毒。對(duì)照組給予玉米油0.5ml/d，后三組每天一次給予玉米油和DEHP混合物0.5m1灌胃染毒。DEHP的染毒量為低劑量組(DEHP10mg/kg/d)、中劑量組(DEHP100mg/kg/d)和高劑量組(DEHP750mg/kg/d)。在生后第21天，每組隨機(jī)取10只子鼠，獲肺泡巨噬細(xì)胞(AM)，以及肺組織標(biāo)本。
　　 2．檢測(cè)指標(biāo)記錄母鼠體重和生后第21天子鼠體重。在生后21天給子

3、鼠股動(dòng)脈放血處死子鼠，采用支氣管肺泡灌洗，用含10％小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液貼壁分離和培養(yǎng)肺泡巨噬細(xì)胞(AMΦ)2h。測(cè)定巨噬細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量，以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性。然后取右肺中葉，常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色、Masson三色染色法，觀(guān)察不同劑量DEHP染毒的子鼠光鏡下肺組織的形態(tài)學(xué)改變，透射電鏡觀(guān)察肺超微結(jié)構(gòu)變化。

4、免疫組化法(IHC)檢測(cè)肺組織骨橋蛋白(OPN)的表達(dá)，取新鮮肺組織用RT-PCR檢測(cè)OPN基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1．體重中、高劑量組子鼠體重明顯下降，分別與正常對(duì)照組和低劑量組比較有顯著差異(P＜0.01)。中、高劑量實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較也有顯著性差異(P＜0.05)，劑量越大，體重下降越明顯。
　　 2.肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)生化指標(biāo)低劑量組子鼠肺組織GSH-PX、SOD活性稍低于正常對(duì)照組，MDA含量、總NOS以及N

5、O活性稍高于正常對(duì)照組，但兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中劑量組和高劑量組子鼠肺組織GSH-PX、SOD活性明顯低于正常對(duì)照(P＜0.05，P＜0.01)。中劑量組和高劑量組MDA含量、總NOS以及NO活性高于正常組(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 3．肺形態(tài)學(xué)分析HE染色低劑量組和中劑量組與正常對(duì)照組比較變化不大，但在高劑量組子鼠顯示肺間質(zhì)增厚、肺間質(zhì)細(xì)胞增多，肺泡數(shù)目減少。Masson三色染色顯示，正常對(duì)照組子鼠僅肺內(nèi)血管壁可見(jiàn)少

6、量被染成藍(lán)色的膠原纖維，低劑量組子鼠肺細(xì)小動(dòng)脈以及肺間質(zhì)均見(jiàn)有藍(lán)色的膠原纖維沉積，中劑量組和高劑量藍(lán)色膠原纖維沉積更為顯著。
　　 4．肺電鏡超微結(jié)構(gòu)觀(guān)察正常對(duì)照組、低劑量組未見(jiàn)明顯病理改變。中劑量和高劑量組子鼠肺組織出現(xiàn)一些病理性變化：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞核固縮，微絨毛較少，板層小體增多，間質(zhì)膠原纖維增生。高劑量組核固縮，細(xì)胞染色質(zhì)邊聚，可見(jiàn)板層小體空化，線(xiàn)粒體變圓、空泡化，肺間質(zhì)見(jiàn)膠原纖維斷裂。
　　 5．肺組織OPN蛋

7、白的表達(dá)正常對(duì)照組子鼠肺組織OPN表達(dá)主要見(jiàn)于支氣管、肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)；低劑量組子鼠肺細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞以及周?chē)奘杉?xì)胞均見(jiàn)有OPN的表達(dá)，中劑量組和高劑量表達(dá)更強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 6．肺組織OPN的mRNA表達(dá)水平中劑量和高劑量組子鼠肺組織OPNmRNA表達(dá)升高(P＜0.05)，低劑量組OPNmRNA表達(dá)也有升高趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1．中、高劑量DEHP母鼠染毒可激