鄰苯二甲酸(2-乙基己基)酯對原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元的毒性研究.pdf

1、2011年5月臺灣地區(qū)發(fā)生“塑化劑”事件,這一事件的元兇——鄰苯二甲酸(2—乙基己基)酯(DEHP)得到了全社會空前的關注.DEHP在工業(yè)上有廣泛的應用,常用來增強塑料的可塑性,主要用在聚氯乙烯(PVC)塑料制品中,在保鮮膜、食品包裝材料、玩具以及醫(yī)療器械用品中均有應用.在這次事件中DEHP被不法商家用在食品飲料中以代替食品添加劑“起云劑”,這是近年來臺灣最嚴重的食品安全事件.此外,對于添加了DEHP的PVC塑料制品做成的食品包裝材料,

2、DEHP也可能從食品包裝材料中遷移到食品或水中.
　　人們對于DEHP對動物和人體的毒性已經(jīng)有廣泛的研究,除了DEHP對生殖和發(fā)育系統(tǒng)的影響以外,也有大量實驗結(jié)果表明 DEHP可通過氧化損傷對不同種系的體外培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生毒性作用.細胞的氧化損傷是氧化和抗氧化作用失衡的結(jié)果,氧化損傷是引起組織和細胞凋亡的一個重要機制.
　　人體腦組織中含有的與氧化有關的物質(zhì)水平較高,同時腦內(nèi)抗氧化酶及非酶的自由基清除劑含量很低,使得腦組織極容

3、易受到自由基損傷,腦內(nèi)神經(jīng)元的死亡與多種神經(jīng)退行性疾病有關.大腦海馬是學習和記憶的主要場所,海馬神經(jīng)元的損傷與阿爾茨海默病(Alzheimer‘s disease，AD)有密切關系.本論文重點研究DEHP對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的毒性作用,探討其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響.
　　實驗目的:從細胞水平上研究DEHP對海馬神經(jīng)元的毒性作用,從而揭示DEHP對中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能的影響,為DEHP的安全性評價提供一定的數(shù)據(jù)支持.
　　實驗方法

4、:采用無血清培養(yǎng)方法進行Wistar大鼠胎鼠海馬神經(jīng)元的培養(yǎng),在倒置熒光顯微鏡下觀察海馬神經(jīng)元生長狀態(tài),及DEHP對神經(jīng)元形態(tài)的影響.根據(jù)相關的文獻中DEHP對細胞起到毒性作用的濃度摸索DEHP引起海馬神經(jīng)元毒性的濃度,用MTT法研究DEHP對海馬神經(jīng)元活力的影響.通過熒光染料Hoechst33258染色觀察,及凋亡酶Caspase-3活力測定,研究海馬神經(jīng)元的凋亡.用熒光染料DCFH-DA對培養(yǎng)海馬神經(jīng)元進行熒光染色,通過激光掃描共聚

5、焦顯微鏡分析細胞內(nèi)ROS的水平,并測定神經(jīng)元超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)的含量,探究DEHP對海馬神經(jīng)元的氧化損傷.
　　實驗結(jié)果:與用胎牛血清培養(yǎng)的神經(jīng)元相比,無血清培養(yǎng)能得到純度較高并且生長狀態(tài)良好的神經(jīng)元.經(jīng)過濃度摸索,最終確定試驗中采用的DEHP濃度分別為0.25mM,0.5mM,1mM,2mM,3mM.形態(tài)觀察和MTT實驗結(jié)果表明DEHP造成海馬神經(jīng)元形態(tài)的改變和細胞活力的下降,并且這一影響與DEHP