鄰苯二甲酸二乙基己基酯對(duì)新生大鼠肺成熟的影響.pdf

1、目的： 1.探討鄰苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)對(duì)新生大鼠肺成熟的影響。 2.探討11β-羥類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)是否參與DEHP影響肺成熟的過程。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組：Sprague-Dawley雌鼠40只，體重在250g-300g。受孕后第12天開始每天給母鼠灌胃玉米油或DEHP，自然分娩后繼續(xù)灌胃直至獲取所需的子鼠標(biāo)本，子鼠均由母鼠哺乳喂養(yǎng)。對(duì)照組給予玉米油0.5ml/d，實(shí)驗(yàn)

2、組分為低劑量組(DEHP10mg/kg/d)、中劑量組(DEHP100mg/kg/d)和高劑量組(DEHP750mg/kg/d)。在生后第1天和第21天處死子鼠，獲取肺組織標(biāo)本，并進(jìn)行檢測(cè)。 2.檢測(cè)指標(biāo)：記錄母鼠體重，死胎發(fā)生率，及生后第1天和第21天子鼠體重。分別在生后第1天、21天給子鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(35mg/kg-1bw)，麻醉后處死子鼠，取右肺中葉，常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行形

3、態(tài)學(xué)分析，計(jì)算輻射狀肺泡計(jì)數(shù)(RAC)和肺間質(zhì)比例，透射電鏡觀察肺超微結(jié)構(gòu)變化。取新鮮肺組織用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-timePCR)方法檢測(cè)肺表面活性物質(zhì)蛋白A(SP-A)、表面活性物質(zhì)蛋白B(SP-B)和11β-羥類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)的mRNA的表達(dá)，用Pfaffi法計(jì)算目的基因與內(nèi)參β-Actin基因之比的相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果： 1.子鼠體重比較生后第1天各實(shí)驗(yàn)組子鼠體重和對(duì)照組相比明顯下降(P＜0.

4、01)，中劑量組和高劑量組體重下降比低劑量組更明顯(P＜0.05)，中劑量組和高劑量組之間比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。生后第21天各實(shí)驗(yàn)組子鼠體重和對(duì)照組比較明顯下降(P＜0.01)，各實(shí)驗(yàn)組之間兩兩比較也有顯著性差異(P＜0.05)，劑量越大，體重下降越明顯。 2.肺形態(tài)學(xué)分析子鼠生后第1天，低劑量組和中劑量組與對(duì)照組在肺形態(tài)學(xué)方面比較無顯著性差異(P＞0.05)。但在高劑量組顯示肺間質(zhì)增厚、肺間質(zhì)細(xì)胞增多，肺泡數(shù)目減

5、少，輻射狀肺泡計(jì)數(shù)(RAC)減少(P＜0.05)，肺間質(zhì)比例增大(P＜0.05)，提示高劑量組在子鼠生后第1天肺泡發(fā)育已受抑制。第21天各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組RAC和肺間質(zhì)比例比較均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3.肺電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察在子鼠生后第1天，對(duì)照組、低劑量組和中劑量組肺組織均沒有病理性改變，但高劑量組出現(xiàn)一些病理性變化：肺泡Ⅱ型細(xì)胞整個(gè)胞質(zhì)深染核固縮，微絨毛較少，板層小體增多，形態(tài)不規(guī)則。子鼠生后21天，對(duì)照組、低劑量組

6、和中劑量組未見明顯病理改變，高劑量組的基本病理變化和第1天相似，但程度更嚴(yán)重，可見肺泡腔滲液，上皮細(xì)胞脫落。 4.肺表面活性物質(zhì)蛋白A(SP-A)、肺表面活性物質(zhì)蛋白B(SP-B)、11β-羥類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)mRNA表達(dá)在子鼠生后第1天和第21天各個(gè)實(shí)驗(yàn)組SP-A、SP-BmRNA表達(dá)與各自時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組相比均沒有顯著性差異(P＞0.05)。第1天各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的11β-HSD1mRNA表達(dá)和對(duì)照組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＞0.05)；第21天各個(gè)實(shí)驗(yàn)組11β-HSD1mRNA表達(dá)和對(duì)照組相比都有減少(3組的P值均＜0.05)，劑量越高，減少越明顯。 結(jié)論： 1.各劑量組母鼠灌胃DEHP后顯著抑制胎鼠在宮內(nèi)體重增長，母鼠哺養(yǎng)的子鼠至生后21天體重仍顯著低于對(duì)照組。 2.高劑量母鼠灌胃DEHP后可抑制胎鼠在宮內(nèi)肺泡的發(fā)育，生后子鼠肺泡發(fā)育可以逆轉(zhuǎn)，至生后21天時(shí)趕上正常對(duì)照組肺泡的發(fā)育。 3.高劑量母鼠灌胃DEHP后可