葉酸對(duì)阿爾茨海默病小鼠模型腦內(nèi)Aβ沉積的抑制作用及其機(jī)制.pdf

1、目的:
　　研究葉酸（folic acid）作用于APP/PS1小鼠腦組織中APP淀粉樣酶切途徑的環(huán)節(jié)，探討其抑制Aβ沉積的作用機(jī)制，為研究葉酸對(duì)阿爾茨海默病的防治作用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將6月齡雄性 APP/PS1小鼠模型隨機(jī)分為以下4組：AD葉酸缺乏組（folate-deficient diet plus daily gavage with water,AD+FA-D）；AD葉酸對(duì)照組（control

2、diet plus daily gavage with water,AD+FA-N）；AD葉酸補(bǔ)充低劑量組（control diet plus daily gavage with120μg/kgfolic acid,AD+FA-L）；AD葉酸補(bǔ)充高劑量組（control diet plus daily gavage with600μg/kgfolic acid,AD+FA-H）。APP/PS1小鼠模型同月齡野生型小鼠作為陰性對(duì)照組（co

3、ntrol diet plus daily gavage with water,WT+FA-N）。AD+FA-D組飼以葉酸缺乏飼料，其它各組飼以對(duì)照飼料，AD+FA-L組灌胃120μg/kg bw·d葉酸溶液，AD+FA-H組灌胃600μg/kg bw·d葉酸溶液，其它各組灌胃雙蒸水。每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整灌胃量，干預(yù)60d。采用 IMMULITE、葉酸化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒檢測(cè)血清葉酸濃度；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)腦

4、組織淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）、BACE1、ADAM9、ADAM10、早老素1（presenilin1，PS1）的mRNA水平；免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表達(dá)；用免疫組化法檢測(cè)腦組織β-淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）；用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)腦組織中Aβ1–40和Aβ1–42的含量。

5、r>　　結(jié)果:
　　葉酸干預(yù)60d后，化學(xué)免疫發(fā)光法檢測(cè)的血清葉酸濃度結(jié)果為：在葉酸干預(yù)前，5組血清葉酸的濃度處于同一個(gè)水平，隨著干預(yù)時(shí)間的變化，血清葉酸水平也有所改變。干預(yù)1w后，AD+FA-D組血清葉酸濃度低于其它各組；AD+FA-L組、AD+FA-H組與 AD+FA-N組相比，血清葉酸水平提高(P<0.05)。免疫組化檢測(cè)腦組織 Aβ蛋白結(jié)果顯示：與AD+FA-N組相比，AD+FA-H組 Aβ蛋白表達(dá)降低，AD+FA-D組表

6、達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但AD+FA-L組無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。ELISA檢測(cè)腦組織中 Aβ1–40和Aβ1–42的含量結(jié)果顯示：與 AD+FA-N組相比，除WT+FA-N組Aβ1–40含量有所降低，其他四組均沒有明顯差別；與 AD+FA-N組相比，AD+FA-H組 Aβ1–42的含量降低，AD+FA-D組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但AD+FA-L組無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P>0.05)。RT-PCR檢測(cè)腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1的mRNA水平顯示：與 AD+FA-N組相比，AD+FA-D組APP、BACE1、PS1的mRNA水平均升高，而ADAM9、ADAM10的mRNA水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；AD+FA-L組、AD+FA-H組 APP、BACE1、PS1的mRNA水平均降低；而ADAM9、ADAM10的mRNA水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

8、.05)；Western Blot檢測(cè)腦組織APP、BACE1、ADAM9、ADAM10、PS1、NCT的蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：與 AD+FA-N組相比，AD+FA-D組APP、BACE1、PS1的蛋白水平均升高，而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；AD+FA-L組、AD+FA-H組 APP、BACE1、PS1的蛋白水平均降低；而ADAM9、ADAM10的蛋白水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

9、5)；但是各組蛋白的NCT結(jié)果顯示表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　葉酸補(bǔ)充減少了腦組織Aβ沉積以及Aβ1–42的含量，而葉酸缺乏增加了腦組織 Aβ沉積以及Aβ1–42的含量。葉酸可能通過抑制小鼠腦組織的淀粉樣蛋白生成途徑的分泌酶 APP、BACE1、PS1、NCT的mRNA水平和蛋白表達(dá)，減少Aβ的產(chǎn)生；增加小鼠腦組織的非淀粉樣蛋白生成途徑的分泌酶ADAM9、ADAM10的mRNA水平和蛋白表達(dá)，減少