益心康對感染柯薩奇病毒B3的體外心肌細胞凋亡相關(guān)因子Fas-FasL的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 通過建立體外感染柯薩奇病毒(CVB3)大鼠乳鼠心肌細胞的模型，探討益心康對體外感染CVB3的大鼠乳鼠心肌細胞的保護作用，初步分析其對細胞凋亡相關(guān)因子Fas/Fasl的影響，為中藥復方益心康的進一步臨床應用奠定了理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.原代心肌細胞培養(yǎng):取出生1-3天的SD大鼠乳鼠，消毒，開胸，取心，清洗，取心尖部心室肌，剪碎。用胰蛋白酶消化，收集上清離心，加培養(yǎng)基將沉淀吹打均勻，差速貼壁

2、1小時，去除成纖維細胞，將未貼壁的細胞懸液放置培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，隔日換液。每日于倒置熒光顯微鏡下觀察心肌細胞。
　　 2.常規(guī)Hela細胞培養(yǎng)。
　　 3.病毒擴增并測CVB3病毒半數(shù)組織感染量(TCID50)
　　 4.提取益心康藥液。
　　 5.測益心康藥液提取液及利巴韋林注射液作用于心肌細胞時的最大無毒劑量(TCID0)。
　　 6.實驗分組及藥物干預:取已貼壁生長長勢良好的心肌細胞，分成四組:

3、正常細胞對照組，病毒對照組，益心康治療組，利巴韋林治療組。分別于培養(yǎng)24小時、48小時時在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞病變(CPE)，若病毒對照組CPE出現(xiàn)100％（++++）時，立刻停止培養(yǎng)。
　　 7.指標的檢測:
　　 (1)倒置熒光顯微鏡下觀察24小時及48小時心肌細胞各組形態(tài)學變化及細胞病變(CPE)。
　　 (2)用RT-PCR方法檢測各組心肌組織中Fas、FasLmRNA的表達
　　 8.統(tǒng)計分

4、析
　　 實驗結(jié)果:
　　 1、益心康組的細胞病變輕于利巴韋林組。
　　 2、益心康組細胞給藥48小時后的Fas、FasLmRNA的表達較病毒組降低，有統(tǒng)計學差異(p＜0.05）。益心康組及利巴韋林組減輕Fas、FasLmRNA的表達效果無明顯差異(p＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、益心康可以減輕細胞病變，對心肌細胞有保護作用。
　　 2、益心康可有效減輕細胞凋亡相關(guān)因子Fas、F