白芍總苷對柯薩奇B-,3-病毒感染大鼠原代心肌細(xì)胞的血清藥理學(xué)干預(yù).pdf

1、目的：探討白芍總苷對柯薩奇B<,3>病毒(CVB<,3>)感染大鼠原代心肌細(xì)胞有無保護(hù)作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：本研究分成三個(gè)部分。 第一部分是SD大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)。取出生1-3dSD乳鼠15只，無菌取其心室肌用0.25％胰蛋白酶消化后制成心肌單細(xì)胞懸液，移入培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)。 第二部分是各組含藥血清的制備。取30只6～8周齡SD大鼠，隨機(jī)分為6組，每組5只，分別為TGP低劑量組(50mg/k

2、g.d)、TGP中劑量組(100mg/kg.d)、TGP高劑量組(200mg/kg.d)、干擾素組、雙黃連組(60mg/kg.d)、正常血清組。干擾素組腹腔注射干擾素5×10<'5>U 1次/d/只，正常血清組不給任何藥物。余組按各組劑量灌胃，2次/d，連續(xù)3d。末次給藥1h后心臟采血10ml制成六組含藥血清。并采用倍比稀釋法測定含藥血清對心肌細(xì)胞的毒性，根據(jù)細(xì)胞病變(CPE)結(jié)果設(shè)定含藥血清終濃度為20％。 第三部分是含藥血清

3、對CVB<,3>感染大鼠原代心肌細(xì)胞的干預(yù)。取長成單層乳鼠心肌細(xì)胞，分成8組：①細(xì)胞對照組②病毒對照組③TGP低劑量組④TGP中劑量組⑤TGP高劑量組⑥干擾素組⑦雙黃連組⑧正常血清組。各孔單層細(xì)胞中，除細(xì)胞對照組外，余組均按0.1ml/孔量加入含100TCID<,50>CVB<,3>的維持液。同時(shí)各組加入對應(yīng)含藥血清0.1ml/孔，置37℃5％CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待病毒對照組CPE出現(xiàn)++++時(shí)，停止培養(yǎng)，取各組細(xì)胞上清液用酶聯(lián)免

4、疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)，置光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測細(xì)胞存活率。 結(jié)果：(1)TGP高劑量組、干擾素組及雙黃連組細(xì)胞存活率分別為(90±4)％、(85±7)％、(85±5)％。病毒對照組細(xì)胞存活率為(43±6)％，其均數(shù)比較P<0.05。而TGP低、中劑量組及正常血清組細(xì)胞存活率分別為(4.5±3)％、(48±6)％、(42±