臍橙果實成熟過程中主要香氣物質(zhì)含量的變化及其關(guān)鍵基因的表達.pdf

1、近年來，對柑橘果實香氣物質(zhì)的研究主要集中在發(fā)現(xiàn)新的香氣物質(zhì)和建立新的檢測方法等方面。盡管在柑橘中已鑒定出200多種香氣物質(zhì)，但有關(guān)這些物質(zhì)的生物合成途徑及其調(diào)控機制的研究報道卻很少。為了探索柑橘果實香氣物質(zhì)的生物合成與其關(guān)鍵基因之間的關(guān)系，本論文以紅肉臍橙(Citrus sinensis Osbeck cv．CaraCara)和華盛頓臍橙(Citrus sinensis Osbeck cv. Washington)果實為研究對象，采用固

2、相微萃取(SPME)和氣相色譜、質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對實驗材料的香氣成分進行了分析，克隆了柑橘果實香氣代謝過程中的3個關(guān)鍵基因（牻牛兒基焦磷酸合成酶基因Csgpps、d-檸檬烯合成酶基因Csdlims和芳樟醇合成酶基因Cslinas），并通過實時熒光定量PCR技術(shù)(RT-qPCR)對這三個基因做了表達分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．以環(huán)己酮為內(nèi)標，d-檸檬烯為標樣，利用SPME-GC-MS定量法測定了紅肉臍橙和華盛頓臍

3、橙不同成熟期果皮和果肉中d-檸檬烯的含量。結(jié)果表明：紅肉臍橙果皮d檸檬烯呈現(xiàn)先降低后升高最后再降低的變化趨勢；果肉d-檸檬烯在早期變化不大，后期含量迅速升高。華盛頓臍橙果皮和果肉d-檸檬烯則呈現(xiàn)出幾乎一致的變化趨勢，即先升高后再降低的變化趨勢。這表明不同的柑橘品種其香氣物質(zhì)的變化規(guī)律不同，相同品種不同組織中香氣物質(zhì)呈現(xiàn)出相同或不同的變化規(guī)律。
　　 2．以環(huán)己酮為內(nèi)標，利用SPME-GC-MS半定量法測定了紅肉臍橙和華盛頓臍橙不

4、同成熟期果皮和果肉中主要香氣物質(zhì)的含量變化。結(jié)果表明：紅肉臍橙果皮中的主要香氣物質(zhì)α-蒎烯、β-月桂烯、γ-萜品烯在果實成熟過程中的變化趨勢相似，即在花后210d時含量達最高值，β-芳樟醇的變化趨勢則與上述3種物質(zhì)相反。紅肉臍橙果肉中的主要香氣物質(zhì)α-蒎烯、β-月桂烯、γ-萜品烯、巴倫西亞橘烯在果實成熟發(fā)育過程中也呈現(xiàn)相似的變化趨勢，在花后220d時含量均迅速降低為零，果肉中沒有檢測到β-芳樟醇這種物質(zhì)。華盛頓臍橙果皮中α-蒎烯、β-月

5、桂烯和γ-萜品烯均呈現(xiàn)直線升高的變化趨勢，β-芳樟醇則在花后200d到210d期間略有下降。果肉中α-蒎烯、β-月桂烯和γ-萜品烯在花后190d到200d期間均呈現(xiàn)迅速降低后保持不變的趨勢，巴倫西亞橘烯的變化趨勢則與上述3種物質(zhì)不同，果肉中也沒有檢測到β-芳樟醇這種物質(zhì)。
　　 3．利用RT-qPCR技術(shù)對克隆到的關(guān)鍵酶基因進行了表達分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅肉臍橙和華盛頓臍橙果肉成熟過程中Csdlims基因的上調(diào)表達和下調(diào)表達的變化趨勢