一氧化氮(NO)、殼寡糖和花青素對(duì)桃果實(shí)采后褐腐病控制機(jī)理初步研究.pdf

1、本文以肥城桃為試材，在一氧化氮(NO)、殼寡糖和花青素等生物學(xué)作用的基礎(chǔ)上，結(jié)合果蔬采后病害防治方法、分子生物學(xué)方法和現(xiàn)代化學(xué)儀器分析等手段，從NO和病原菌菌絲及孢子的互作入手，研究外源NO對(duì)桃褐腐病病原菌的生長(zhǎng)和致病力的影響作用，研究外源NO等處理對(duì)采后桃果實(shí)褐腐病的防治作用，系統(tǒng)探討外源NO處理對(duì)桃果實(shí)防御酶（幾丁質(zhì)酶、β-1，3-葡聚糖酶）活性及抗病相關(guān)基因（幾丁質(zhì)酶基因、β-1，3-葡聚糖酶基因、病程相關(guān)蛋白1基因、病程相關(guān)蛋白

2、10基因）表達(dá)的影響，進(jìn)而探索影響NO抗病途徑的關(guān)鍵因子，為NO在果實(shí)防腐保鮮上的實(shí)際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，深入探討外源NO等對(duì)采后桃果實(shí)褐腐病的防治效果及防治機(jī)理。此外實(shí)驗(yàn)還擴(kuò)展了殼寡糖和花青素在果實(shí)采后病害的防治應(yīng)用中的潛在價(jià)值和并初步探討其作用機(jī)理。
　　 肥城桃是我國(guó)的名優(yōu)果品，屬中晚熟品種，8月底至9月上旬采收，由于采收期溫度較高，果實(shí)極易腐爛。褐腐病(Monilinia fructieola(G.Wint) Honey)是肥

3、城桃果實(shí)上最常見也是危害嚴(yán)重的病害之一，果實(shí)一旦感病，會(huì)迅速發(fā)生大面積腐爛，致使桃的貯藏、運(yùn)輸、銷售等受到局限。
　　 本研究首先利用不同濃度NO溶液（0、5、15、30和100μmol L-1）處理褐腐菌孢子觀察NO對(duì)褐腐菌菌絲生長(zhǎng)孢子萌發(fā)和致病力的影響，結(jié)果顯示5、15和30μmol L-1 NO處理未對(duì)褐腐菌產(chǎn)生顯著性影響，100μmol L-1 NO處理明顯抑制了孢子的萌發(fā)、菌絲的生長(zhǎng)和致病力。
　　 分別利用去

4、離子水、15μmol L-1 NO、5μmol L-1 cPTIO、1.5％的殼寡糖和1.5％的紫甘薯花青素分別處理接種褐腐菌（5×105個(gè)孢子/mL）后的肥城桃果實(shí)，分別于1、2、3、4、5d測(cè)定病斑面積和發(fā)病率，果實(shí)于接種后的0、12、24、48、72 h取樣后測(cè)定幾丁質(zhì)酶(CHI)和β-1，3-葡聚糖酶(GNS)活性變化，利用熒光定量PCR方法測(cè)定病程相關(guān)蛋白1基因(PR-1)、病程相關(guān)蛋白10基因(PR-10)、幾丁質(zhì)酶基因(C

5、HI)及β-1，3-葡聚糖酶基因(GNS)的相對(duì)表達(dá)量。外源NO、殼寡糖和花青素處理均可以有效抑制肥城桃果實(shí)褐腐病病斑的擴(kuò)展，延緩果實(shí)發(fā)病，cPTIO處理促進(jìn)果實(shí)發(fā)病和病斑面積擴(kuò)展;外源NO和殼寡糖均能有效提高果實(shí)PR-1、PR-10、CHI及GNS的相對(duì)表達(dá)量及CHI和GNS的活力，花青素能明顯提高果實(shí)CHI基因的相對(duì)表達(dá)量及CHI活力，在處理后的初期可以提高PR-1及PR-10的相對(duì)表達(dá)量，但是不能提高GNS的相對(duì)表達(dá)量和GNS的活

6、力，cPTIO處理抑制果實(shí)PR-1、PR-10、CHI及GNS的相對(duì)表達(dá)量及CHI和GNS的活力。外源NO、殼寡糖和花青素均可以通過提高肥城桃果實(shí)病程相關(guān)蛋白基因的表達(dá)量和酶活性從而提高其抗病性。
　　 此外本研究通過提取效率優(yōu)化紫甘薯中花青素的提取條件，分別對(duì)提取溶液、提取濃度、提取溫度、提取時(shí)間、提取固液比進(jìn)行優(yōu)化，紫甘薯花青素最適宜提取條件為15％乙酸溶液、40℃、60 min、1∶25（g/mL）固液比，此方法提取紫甘薯