桃小食心蟲病原真菌的分離鑒定及其致病性研究.pdf

1、桃小食心蟲Carposinasasakii(Matsumura)(Lepidoptera:Carposinidae)是我國(guó)北方果樹在生長(zhǎng)過程中危害最重、影響范圍最廣的果實(shí)食心蟲類害蟲之一。目前防治桃小食心蟲的方法，還是以化學(xué)農(nóng)藥為主?；瘜W(xué)農(nóng)藥雖然見效快、成本低，但害蟲在長(zhǎng)時(shí)期的化學(xué)農(nóng)藥防治中，已經(jīng)產(chǎn)生了很強(qiáng)的抗藥性，且化學(xué)農(nóng)藥污染環(huán)境、有農(nóng)藥殘留，對(duì)果實(shí)品質(zhì)安全構(gòu)成極大的威脅。積極發(fā)展和推廣生物防治技術(shù)成為全球當(dāng)前果樹栽培需求的總趨勢(shì)。

2、利用病原真菌防治桃小食心蟲是生物防治的重要方法之一。本文從山西臨汾景毛鄉(xiāng)果園染菌的桃小食心蟲幼蟲蟲尸中分離純化獲得一株新菌株，對(duì)桃小食心蟲的生物防治具有重要的意義。主要內(nèi)容包括:(1)病原真菌的分離、純化，培養(yǎng)性狀、光學(xué)顯微形態(tài)和掃描電鏡觀察，分子鑒定；(2)病原真菌的生物學(xué)特性和致病力研究;(3)病原真菌對(duì)桃小食心蟲發(fā)育不同階段的致死效果研究;(4)野外病原真菌的宿存能力和果園殺蟲實(shí)驗(yàn)的研究。
　　 結(jié)果如下:
　　

3、(1)從野外果園自然染菌的桃小食心蟲冬繭中分離出一株新菌株，命名為TSL06。通過對(duì)該菌株的培養(yǎng)性狀、光學(xué)顯微和掃描電鏡下的形態(tài)特征觀察，以及ITS基因序列分析，鑒定出TSL06菌株為綠僵菌屬M(fèi)etarhiziumSorokin的金龜子綠僵菌Metarhiziumanisopliae(Metsch.)Sorokin。菌落呈圓形，不透明，絨毛狀，菌落背面呈棕黃色，分生孢子長(zhǎng)橢圓形，兩端鈍圓，菌絲無色透明，分生孢子梗上有隔?；亟訉?shí)驗(yàn)證明該菌

4、株是桃小食心蟲的病原真菌。該菌株從形態(tài)和分子方面進(jìn)行鑒定，比起單一從形態(tài)或分子方面鑒定要更科學(xué)，更準(zhǔn)確。
　　 (2)研究了該菌株在不同溫度下和紫外照射前后的菌落直徑、產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，該菌株在25℃最適宜生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速率為0.405cm/d-0.475cm/d，產(chǎn)孢量為4.120×108孢子/cm2-4.440×108孢子/cm2，孢子萌發(fā)率為50.67％±0.57％。用該菌株的5種濃度孢子懸液對(duì)桃小食心蟲幼蟲進(jìn)行

5、毒力試驗(yàn)，結(jié)果表明，濃度為1.2×109孢子/mL的孢子懸液對(duì)桃小食心蟲幼蟲的校正致死率最高，達(dá)到86.08％，且不同濃度下的孢子懸液侵染桃小食心蟲，毒力相差比較大，是最低濃度毒力的2.3倍。
　　 (3)用1.2×108孢子/mL的孢子懸浮液去侵染桃小食心蟲蟲卵，然后觀察卵的孵化情況，結(jié)果顯示，該菌懸液感染蟲卵的矯正致死率只有3.33±3.20％，對(duì)蟲卵感染效果不顯著，說明卵殼起到較好的保護(hù)效果。用6.0×107孢子/mL的該

6、菌株孢子懸浮液去侵染結(jié)夏繭的桃小食心蟲幼蟲，對(duì)桃小食心蟲幼蟲的結(jié)繭、羽化率影響比較大，由于實(shí)驗(yàn)組桃小幼蟲受到菌株孢子懸液的侵染，結(jié)繭率只有85.18±2.53％，而對(duì)照組可達(dá)98.04％，不能結(jié)繭的校正死亡率為，12.86％。結(jié)夏繭的滯育期到第11天開始出現(xiàn)羽化，由于實(shí)驗(yàn)組在結(jié)夏繭前已有部分幼蟲真正被孢子懸液感染，所以，羽化率只有46.51±1.73％，而對(duì)照組則高達(dá)83.52％，不能羽化的校正死亡率高達(dá)44.31％。說明該菌株孢子懸液

7、對(duì)結(jié)夏繭的桃小幼蟲侵染效果明顯。用6.0×107孢子/mL的孢子懸液侵染準(zhǔn)備結(jié)冬繭的桃小食心蟲，校正死亡率可以達(dá)到50.65±5.95％。通過我們?cè)谑覂?nèi)建立飼養(yǎng)桃小食心蟲種群，對(duì)桃小三個(gè)蟲態(tài)期分別用菌懸液感染，結(jié)果顯示，對(duì)結(jié)夏繭和結(jié)冬繭的老熟幼蟲用菌感染死亡率高，是兩個(gè)關(guān)鍵防治期，為野外防治桃小提供了科學(xué)依據(jù)。該研究是在實(shí)驗(yàn)室建立桃小食心蟲種群的基礎(chǔ)上，在不同的發(fā)育期侵染靶標(biāo)害蟲，從而了解防治靶標(biāo)害蟲的最佳時(shí)期。
　　 (4)用

8、平板法和原位雜交法檢測(cè)了該菌株在土壤中的宿存能力。用該菌株制成菌粉，撒施在果園的表層土中，在剛?cè)胪恋那皟蓚€(gè)月該菌落數(shù)量下降較快，第一個(gè)月菌落密度為1.3×106孢子/g，第二個(gè)月的菌落密度是4.4×105孢子儋，說明該菌株在剛?cè)胪恋膬蓚€(gè)月有一個(gè)適應(yīng)野外環(huán)境的過程，到第3個(gè)月和第4個(gè)月菌落數(shù)量能夠相對(duì)維持在一個(gè)水平，菌落密度為2.5×105孢子/g。說明該菌株具有較強(qiáng)的宿存能力。原位雜交技術(shù)在真菌的檢測(cè)中還未見到報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)的原位雜交熒光

9、染色法從半定量方面證明了菌株在野外的宿存情況。
　　 野外用菌粉防治桃小食心蟲老熟幼蟲，因桃小老熟幼蟲需在10cm的表層土壤中結(jié)冬繭，滯育期長(zhǎng)達(dá)7-8個(gè)月，生存條件比較艱苦，尤其冬天干旱且濕度低，對(duì)照組自然平均死亡率很高，達(dá)到了89.67±2.08％，染菌實(shí)驗(yàn)組的平均死亡率更高，達(dá)到95.11±1.27％，校正死亡率為52.69±12.28％，蟲口密度降低了一半。因此說明綠僵菌在土壤中不僅具有很強(qiáng)的宿存能力，還具有較強(qiáng)的對(duì)靶標(biāo)害