MEHP、MBP聯(lián)合染毒致小鼠睪丸間質(zhì)細胞氧化應(yīng)激損傷以及枸杞多糖對其保護作用的研究.pdf

1、目的：探討鄰苯二甲酸單(2-乙基)己酯（mono(2-ethylhexyl)phthalate，MEHP和鄰苯二甲酸單丁酯(monobutyl phthalate，MBP)聯(lián)合染毒致體外培養(yǎng)的小鼠睪丸間質(zhì)細胞（TM3）氧化損傷及枸杞多糖對細胞的保護作用。
　　方法：1、將小鼠睪丸間質(zhì)細胞（TM3）在含10％胎牛血清濃度的DMEM高糖培養(yǎng)基條件下體外培養(yǎng)，用濃度為0（對照組）、1、10、100、500、1000umol/L不同濃度梯

2、度的MEHP和MBP作用于小鼠睪丸間質(zhì)細胞48h。2、以MTT法測定細胞活力以及MEHP和MBP對細胞的毒性作用。3、比色法測定細胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）酶活力情況；用試劑盒檢測細胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量。4、用試劑盒檢測細胞線粒體內(nèi)8-OHdG含量。5、用試劑盒檢測細胞Caspase-3酶活力。6、Western blot檢測細胞裂解液中Bax，Bcl-2的表達水平。
　　結(jié)果：1、MEHP和MBP聯(lián)合染毒對TM3細胞的增殖

3、抑制存在交互作用，使細胞存活率明顯降低，表現(xiàn)為協(xié)同作用。2、MEHP和MBP單劑量染毒，隨著染毒濃度的增加，細胞內(nèi)的SOD水平明顯降低；MEHP和MBP聯(lián)合染毒組呈現(xiàn)協(xié)同作用。3、MEHP和MBP單劑量染毒，隨著染毒濃度的增加，細胞內(nèi)的MDA水平明顯升高；MEHP和MBP聯(lián)合染毒組呈現(xiàn)協(xié)同作用。4、熒光電鏡結(jié)果顯示，聯(lián)合染毒組可見大部分細胞死亡，剩余細胞腫脹堆積、變暗，間隙更大。5、MEHP和MBP單劑量染毒，隨著染毒濃度的增加，細胞內(nèi)

4、線粒體8-OHdG含量明顯升高；MEHP和MBP聯(lián)合染毒組呈現(xiàn)協(xié)同作用。6、MEHP和MBP聯(lián)合染毒致細胞內(nèi)Caspase-3活力增加，提示染毒誘導(dǎo)TM3細胞凋亡。7、細胞內(nèi)蛋白水平Bax隨著單劑量MEHP、MBP染毒濃度增加而增加；細胞內(nèi)蛋白水平Bcl-2隨著單劑量MEHP、MBP染毒濃度增加而降低。聯(lián)合染毒組細胞與對照組比較，細胞內(nèi)Bax蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平降低，顯示細胞內(nèi)促細胞凋亡的存在。而枸杞多糖保護組細胞凋亡與聯(lián)合