抑制MTDH基因對前列腺癌DU145細胞有氧糖酵解影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、前列腺癌是常見的男性泌尿系腫瘤,在美國其發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌,成為第一位危害男性健康的腫瘤。晚期前列腺癌常因發(fā)生遠處轉移并容易產(chǎn)生化學耐藥和雄激素抵抗而發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌。異黏蛋白(metadherin,MTDH)是一個與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關的癌基因,參與調(diào)節(jié)腫瘤細胞增殖、侵襲轉移、血管生成、抵抗凋亡和化學耐藥等生物學行為,其在前列腺癌組織中的表達明顯高于前列腺增生和正常前列腺組織。腫瘤中不僅存在基因異常,同時還具有能量代謝異常,

2、偏好有氧糖酵解方式產(chǎn)生能量是腫瘤的一個重要特征。但在前列腺癌中異常表達的MTDH是否與腫瘤細胞糖酵解有關尚不是十分清楚。因此,本研究擬利用藥物抑制MTDH的表達和小干擾RNA技術(small interferingRNA,siRNA)下調(diào)MTDH的表達,觀察其對前列腺癌細胞糖酵解的影響及其分子作用機制,為MTDH作為前列腺癌的潛在治療靶點提供理論和實驗依據(jù)。
  實驗一隱丹參酮抑制MTDH表達對前列腺癌DU145細胞中糖酵解的影響

3、
  目的:探討隱丹參酮抑制MTDH表達對前列腺癌DU145細胞中糖酵解的影響。
  方法:不同濃度隱丹參酮作用DU145細胞不同時間后,MTT檢測各組細胞的增殖情況;葡萄糖和乳酸檢測試劑盒分別檢測各組細胞葡萄糖消耗值及乳酸分泌值;Western blot和逆轉錄PCR(RT-PCR)檢測各組細胞中MTDH和丙酮酸激酶M2(PKM2)的蛋白和mRNA表達情況。
  結果:隱丹參酮能夠抑制DU145細胞的增殖,并且呈明顯

4、時間和劑量依賴性(P<0.05)。隨著隱丹參酮濃度的增加,DU145細胞對葡萄糖的消耗值減少,乳酸分泌值也下降(P<0.05)。MTDH和PKM2蛋白的表達可隨隱丹參酮濃度的增加及作用時間的延長逐漸下調(diào),而且隨著作用時間的延長,MTDH和PKM2 mRNA的表達量也逐漸下降(P<0.05)。
  結論:隱丹參酮能夠抑制前列腺癌DU145細胞的增殖及其糖酵解水平,其可能機制是通過下調(diào)MTDH和PKM2的表達,進而抑制細胞的糖酵解途徑

5、,最終抑制腫瘤細胞的增殖。
  實驗二shRNA下調(diào)MTDH表達對前列腺癌DU145細胞中糖酵解的影響
  目的:探討利用shRNA下調(diào)MTDH表達后對前列腺癌DU145細胞中糖酵解的影響。
  方法:建立穩(wěn)定沉默MTDH的前列腺癌細胞株和空載體細胞株,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的改變,細胞免疫組化、Western blot和逆轉錄PCR技術檢測干擾效果;MTT檢測MTDH基因下調(diào)對DU145細胞增殖的影響;葡萄糖和乳酸

6、檢測試劑盒分別檢測MTDH基因下調(diào)后細胞葡萄糖消耗值和乳酸分泌值;Western blot檢測MTDH基因下調(diào)后細胞中AKT、p-AKT、PKM2蛋白的表達情況,逆轉錄PCR檢測PKM2 mRNA的表達水平。
  結果:MTDH基因下調(diào)后,細胞形態(tài)變圓、間距變大,細胞的增殖能力顯著下降(P<0.05)。細胞對葡萄糖消耗和乳酸分泌也明顯減少(P<0.05)。P-AKT和PKM2蛋白的表達下降,而AKT蛋白的表達無明顯改變,且PKM2

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