BMP7在異氟醚后處理對(duì)抗大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的：
　　大腦缺血后90 min在再灌注即刻單次吸入1 MAC或2 MAC或3 MAC的異氟醚60 min，觀察是否產(chǎn)生腦保護(hù)作用。探討B(tài)MP7在異氟醚后處理局灶性腦缺血再灌注損傷中的作用。
　　方法：
　　清潔級(jí)健康SD雄性大鼠70只，2.5月齡，體重230-260 g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為5組：假手術(shù)組(S組)、單純大腦缺血再灌注組(I/R組)、異氟醚后處理組(1 MAC ISO，ISPOC1組；2 MAC

2、 ISO，ISPOC2組；3 MAC ISO，ISPOC3組)、阻斷劑+異氟醚后處理組（LDN+ISO；Noggin+ISO；SB+ISO組）、阻斷劑組（LDN；Noggin；SB組）。采用大腦中動(dòng)脈線栓法阻斷前腦血供90min、再灌注24h制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型。異氟醚后處理組于再灌注即刻經(jīng)緊閉式異氟醚麻醉箱吸入不同濃度異氟醚+空氣，持續(xù)60 min。S組和IR組在假手術(shù)或MCAO模型制備完成后于再灌注即刻在緊閉式麻醉箱內(nèi)

3、吸入空氣。阻斷劑+異氟醚后處理組分別在制備MCAO前30 min腹腔注射相應(yīng)的阻斷劑，余同ISPOC1組。阻斷劑組分別在制備MCAO前30 min腹腔注射相應(yīng)的阻斷劑，余同MCAO組。所有大鼠分別在再灌注24 h后，觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變，用Zea Longa評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分。完成神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分后分別進(jìn)行TTC染色測(cè)量大鼠腦梗死體積百分比、HE染色觀察大鼠海馬區(qū)的顯微形態(tài)學(xué)改變、凋亡試劑盒染色檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況、

4、尼氏染色觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元內(nèi)蛋白合成功能改變情況、免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠海馬組織CA1區(qū)BMP7、P38MAPK蛋白表達(dá)情況、蛋白印記法觀察大鼠海馬組織BMP7、Smad1/5/8、P38MAPK蛋白表達(dá)的變化。所有統(tǒng)計(jì)分析均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。
　　結(jié)果：
　　模型成功率為79.2％。與I/R組相比，再灌注24 h后，ISPOC1組和ISPOC2組均神經(jīng)功能缺陷評(píng)分及腦梗死面積明顯下降（P<0.05），IS

5、POC3組神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積未見明顯改善（P>0.05）。通過病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)：1 MAC和2 MAC異氟醚后處理能明顯改善MCAO模型鼠再灌注24 h后海馬組織CA1區(qū)的細(xì)胞損傷情況（P<0.05），3 MAC異氟醚后處理組海馬組織細(xì)胞損傷情況和I/R組相比未見明顯改善（P>0.05）。而在后處理前120 min給予腹腔注射BMP7抑制劑LDN-193189或Noggin，1 MAC ISPOC的保護(hù)作用明顯減弱（P<0.05

6、）。再灌注24 h后，1 MAC ISPOC組海馬CA1區(qū)BMP7表達(dá)明顯增加（P<0.05），在后處理前120 min給予腹腔注射BMP7抑制劑Noggin或P38MAPK抑制劑SB203580，CA1區(qū)BMP7表達(dá)明顯下降（P<0.05）。Noggin對(duì)ISPOC后海馬CA1區(qū)BMP7表達(dá)的抑制明顯強(qiáng)于LDN-193189（P<0.05）。阻斷BMP7信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，磷酸化P38MAPK表達(dá)水平上調(diào)，阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，BMP7表