臭氧水治療慢性骨髓炎的路徑選擇及機(jī)理研究.pdf

1、研究背景：
　　 慢性骨髓炎難以治療、復(fù)發(fā)率高，是骨科的難癥之一。慢性骨髓炎的治療基本原則之一就是在充分的抗菌素治療基礎(chǔ)上徹底清除病灶。盡管采用了徹底的清創(chuàng)方法，但局部仍有一定數(shù)量的細(xì)菌殘留。在一定條件下，這些細(xì)菌易大量繁殖，常導(dǎo)致治療失敗。同時(shí)由于局部血供差，導(dǎo)致機(jī)體在局部發(fā)揮殺滅細(xì)菌免疫功能困難。抗生素的局部應(yīng)用越來越受到人們的重視，抗生素的局部應(yīng)用可以直接作用于病變部位，不需血液將藥物抗生素?cái)y帶至病變區(qū)域，可在局部獲得持續(xù)

2、的較高藥物濃度，同時(shí)保持較低的血藥濃度，避免抗生素全身系統(tǒng)用藥的毒副作用。但是隨著近年來抗生素的不合理應(yīng)用，慢性骨髓炎致病菌種類發(fā)生變化, 產(chǎn)生細(xì)菌變異,細(xì)菌耐藥，抗生素的治療效果逐漸下降。
　　 所以，尋找一種新型的抗微生物劑治療骨髓炎，成為本課題的目的之一。臭氧有極好的殺菌、抗炎以及促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用，并且不易產(chǎn)生細(xì)菌耐藥，封閉負(fù)壓吸引起到很好的引流作用，臭氧水灌注負(fù)壓吸引為慢性骨髓炎的治療提供了一種有效的新方法。
　　

3、 目的：
　　 研究不同濃度臭氧水對(duì)金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的殺滅作用，以及對(duì)臭氧水抗炎作用的機(jī)理進(jìn)行研究。制備金黃色葡萄球菌感染的大鼠脛骨慢性骨髓炎的動(dòng)物模型，并在大鼠脛骨近端慢性骨髓炎動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，研究臭氧水灌洗負(fù)壓吸引治療大鼠脛骨慢性骨髓炎的治療效果，為慢性骨髓炎的治療提供一種既能殺菌又能抗炎的新方法，并為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)由4部分組成1、臭氧水對(duì)金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞

4、菌殺滅作用的實(shí)驗(yàn)研究取實(shí)驗(yàn)菌金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌用無菌生理鹽水制備成菌懸液，麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)整含菌量，分別用不同濃度的臭氧水溶液處理不同的時(shí)間作用于兩種菌懸液，計(jì)算兩種細(xì)菌的殺滅率。
　　 2、臭氧水抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究在二甲苯致小鼠耳腫脹模型的基礎(chǔ)上，分別采用2mg/L臭氧水溶液、扶他林膏劑、及生理鹽水濕敷創(chuàng)面，通過觀察耳殼厚度差、重量差、血清TNF-a檢測和組織病理學(xué)，探討臭氧水抗炎作用的機(jī)理。
　　 3、大鼠脛骨

5、慢性骨髓炎動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)采用脛骨近段髓腔注射5％魚肝油酸鈉和不同濃度的金黃色葡萄球菌菌液的方法誘導(dǎo)骨髓炎，并探討誘導(dǎo)的骨髓炎模型與菌液濃度的關(guān)系，為慢性骨髓炎的實(shí)驗(yàn)研究提供一種合適的動(dòng)物模型。
　　 4、臭氧水灌注負(fù)壓吸引治療大鼠脛骨慢性骨髓炎的實(shí)驗(yàn)研究在大鼠慢性骨髓炎模型的基礎(chǔ)上，常規(guī)病灶清創(chuàng)，分別采用2mg/L的臭氧水，慶大霉素溶液、生理鹽水局部灌注骨髓炎創(chuàng)面，半透膜封閉，間斷負(fù)壓引流，通過大體標(biāo)本觀察、放射學(xué)、細(xì)菌學(xué)

6、、ELISA法和組織病理學(xué)方法，闡明臭氧水局部應(yīng)用治療實(shí)驗(yàn)性大鼠脛骨慢性骨髓炎的效果。
　　 結(jié)果：
　　 1、臭氧水對(duì)金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌殺滅作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 2種主要的致骨髓炎的標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌所需的臭氧水的殺菌條件相近，2mg/L臭氧水溶液作用60s或者1mg/L臭氧水溶液作用60s (銅綠假單胞菌),90s (金黃色葡萄球菌)均可100％殺死菌懸液中的細(xì)菌。
　　

7、2、臭氧水抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 臭氧水組（A組）、扶他林組（B組）、生理鹽水組（C組）對(duì)小鼠耳腫脹模型耳殼重量差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析示：A，B組明顯小于C組(P<0.01)，A、B組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；血清TNF-a濃度檢測示：A、B組明顯小于C組(P<0.01)，A、B組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。組織學(xué)觀察顯示：生理鹽水組表皮細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)水腫，能發(fā)現(xiàn)較多的單一核細(xì)胞及少數(shù)多形核細(xì)胞的浸潤，真皮結(jié)締

8、組織水腫，血管周圍可見輕度炎癥細(xì)胞浸潤；臭氧水組及扶他林組水腫消退，炎性細(xì)胞浸潤減少。
　　 3、大鼠脛骨慢性骨髓炎動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)
　　 A組(注入0.lml生理鹽水)，B組(注入0.lml 1×106 CFU/ml細(xì)菌)，C組(注入0.lml 1×108CFU/ml細(xì)菌)，D組(注入0.1ml 1×1010CFU/ml細(xì)菌)，各組造模后4周，影像學(xué)顯示出現(xiàn)不同程度的軟組織腫脹，骨密度降低，骨小梁纖細(xì)，骨小梁間隙加

9、寬，骨皮質(zhì)變薄，骨溶解，死骨形成；組織學(xué)切片顯示均出現(xiàn)不同程度的中性嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，骨髓腔內(nèi)骨細(xì)胞不同程度壞死。注入0.lml 1×108 CFU/ml細(xì)菌，即可獲得可靠穩(wěn)定的大鼠脛骨慢性骨髓炎模型。
　　 4、臭氧水灌注負(fù)壓吸引治療大鼠脛骨慢性骨髓炎的實(shí)驗(yàn)研究
　　 術(shù)后2周各組Norden改良骨髓炎分值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：臭氧水組（A組）、慶大霉素溶液組（B組）、生理鹽水組（C組）比較差異有非常顯著性；術(shù)后2周，大

10、體標(biāo)本可見A、B組保持較正常外觀形狀，末發(fā)現(xiàn)明顯的骨質(zhì)破壞及髓腔膿液，C組標(biāo)本外形粗大，骨質(zhì)破壞明顯，骨缺損邊緣有不規(guī)則增生及硬化，其間可見膿性分泌物；術(shù)后7、14天時(shí)，每克骨組織標(biāo)本細(xì)菌計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：A、B組細(xì)菌計(jì)數(shù)明顯小于C組（P<0.01），A、B組比較，A組細(xì)菌計(jì)數(shù)小于B組（P<0.05）；術(shù)后7、14天時(shí)，局部骨組織TNF-a濃度示：A、B組TNF-a濃度明顯小于C組（P<0.01），A、B組比較，A

11、組濃度小于B組（P<0.05）；組織學(xué)觀察顯示：A、B組炎癥反應(yīng)明顯較C組輕，A組又較B組炎癥反應(yīng)輕。
　　 結(jié)論：
　　 2mg/L的臭氧水的能夠有效殺滅金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌，并且能抑制炎癥反應(yīng)的進(jìn)程，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的消退；臭氧灌注負(fù)壓吸引系統(tǒng)在大鼠脛骨慢性骨髓炎的治療中，臭氧水能夠控制感染、抑制局部炎癥反應(yīng)、促進(jìn)組織修復(fù)，改善骨髓炎的骨組織病理改變，負(fù)壓吸引能通暢引流，避免臭氧泄漏造成的環(huán)境污染，可逐漸替代局部