辣椒疫霉病菌拮抗菌的篩選鑒定、培養(yǎng)條件優(yōu)化及其抑菌作用的研究.pdf

1、辣椒疫病是由辣椒疫霉菌引發(fā)的一種土傳性病害，主要危害辣椒的莖、葉和果實，侵染后可造成植株萎蔫、落葉和果實腐爛。一旦發(fā)病，傳播迅速，對辣椒生產(chǎn)構(gòu)成極大威脅，常造成減產(chǎn)20％-30％，甚至造成毀田絕收，嚴(yán)重影響辣椒的產(chǎn)量和質(zhì)量。當(dāng)前，生產(chǎn)上主要采用甲霜靈、霜脲氰等內(nèi)吸化學(xué)殺菌劑進行防治，但疫霉菌對使用過的內(nèi)吸殺菌劑極易產(chǎn)生抗藥性，而化學(xué)藥劑防治為主的防治措施還會產(chǎn)生藥劑殘留以及環(huán)境污染等問題。所以，對辣椒疫病進行生物防治是當(dāng)前辣椒生產(chǎn)可持續(xù)

2、發(fā)展的必然選擇。
　　1.本研究從43個海南土壤樣本中分離純化篩選出了73株對辣椒疫霉病菌有拮抗作用的細(xì)菌菌株A1～A73，經(jīng)過一系列抑菌試驗發(fā)現(xiàn)菌株A60抑菌活性最高，對辣椒疫霉的抑菌圈半徑高達11.63mm，繼代培養(yǎng)后抑菌效果穩(wěn)定。經(jīng)生理生化特征及16S rDNA序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果，鑒定拮抗菌A60菌株為側(cè)孢短芽孢桿菌（Brevibacillus laterosporus）。
　　2.對拮抗菌A60的抑菌物質(zhì)類型進

3、行了初步研究，結(jié)果表明抑菌物質(zhì)為水溶性，主要存在于發(fā)酵液上清液中，為胞外次級代謝產(chǎn)物。其在發(fā)酵液不同分離部分的抑菌效果:全菌液＞上清液＞菌懸液＞細(xì)胞破碎液。不同實施倍數(shù)發(fā)酵液對辣椒疫霉病菌的抑菌效果:10倍稀釋的發(fā)酵液抑菌率可達到78.7％，20倍稀釋液抑制率為62.8％。拮抗菌A60發(fā)酵液中的少量揮發(fā)性物質(zhì)對辣椒疫霉病菌的菌絲生長有一定的抑制作用。A60對辣椒疫霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、梨黑斑病菌等病原菌均有明

4、顯的抑制作用。
　　3.為提高A60發(fā)酵產(chǎn)物對辣椒疫霉病菌的拮抗效果，對其發(fā)酵培養(yǎng)基成分及發(fā)酵工藝進行優(yōu)化:在篩選確定A60的最適碳源、氮源和無機鹽的基礎(chǔ)上，采用正交設(shè)計法優(yōu)化可溶性淀粉、酵母粉和氯化鈉的濃度，研究培養(yǎng)溫度、pH、接種量、裝液量等因素對A60抑菌活性的影響，最終確定了側(cè)孢短芽孢桿菌A60的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件為可溶性淀粉1％、酵母粉2％、氯化鈉0.2％，起始pH為7.0，接種量2％，裝量為100mL/250mL

5、三角瓶，發(fā)酵溫度為37℃。
　　4.辣椒疫霉病在辣椒和甜椒上均有發(fā)生，本試驗使用抑菌效果較好的側(cè)孢短芽孢桿菌A60的無菌發(fā)酵液分別在辣椒和甜椒上進行防效試驗。試驗結(jié)果表明，加入拮抗菌A60無菌發(fā)酵液的辣椒，在第3d時防效可達到100％,第5d防效達95.71％,第7d仍可達到92.22％,說明拮抗菌A60能夠明顯的降低辣椒疫霉病在辣椒上的發(fā)病率和病情指數(shù)，并且具有很好的持效性。加入拮抗菌A60無菌發(fā)酵液的甜椒，在第3d時防效達到1