草莓重茬病菌拮抗細菌篩選鑒定及其抑菌機理初步研究.pdf

1、本研究從藥用植物材料混配的腐解物和經(jīng)上述植物材料混合處理3個月后的草莓重茬土壤中共分離純化得到40株不同形態(tài)的細菌。經(jīng)平板對峙培養(yǎng)法測定40株待測細菌的拮抗作用，結(jié)果表明：只有菌株Bs-21對立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌和大麗輪枝菌這三種病原菌的抑菌帶寬度都達到5mm以上，且病原菌與拮抗菌之間形成抑菌帶的寬度不隨時間的推移而顯著改變。 對Bs-21進行鑒定，其形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀以及生理生化特征均與伯杰氏細菌鑒定手冊(第八版)中描述的枯

2、草芽孢桿菌的特征相符合，因此確定其為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。 通過對Bs-21的抑菌機制研究表明，Bs-21的菌體和代謝產(chǎn)物均有一定的抑菌作用。采用對峙培養(yǎng)法測定了Bs-21的菌體對三種病原菌菌絲的抑制作用，通過顯微鏡觀察，三種病原菌的菌絲的生長均受到抑制，并引起菌絲不同形態(tài)的畸形、原生質(zhì)凝結(jié)、內(nèi)含物外溢等現(xiàn)象；說明Bs-21可能產(chǎn)生多肽類和水解酶類物質(zhì)。 測定了Bs-21不同處理對尖孢鐮刀菌和

3、大麗輪枝菌的分生孢子萌發(fā)的影響，結(jié)果表明，Bs-21的發(fā)酵液濾液、高溫殺死菌體的發(fā)酵液和發(fā)酵液原液對尖孢鐮刀菌分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為37.27﹪、45.69﹪和69.56﹪，對大麗輪枝菌的分生孢子萌發(fā)的抑制率分別為62.11﹪、61.56﹪和72.27﹪；同時Bs-21發(fā)酵液的不同處理都能不同程度地引起尖孢鐮刀菌孢子的畸形和萌發(fā)形成的芽管產(chǎn)生泡狀物；引起大麗輪枝菌的分生孢子的膨大畸形，芽管長度明顯低于PD培養(yǎng)液對照；此外，Bs-21

4、的高溫滅菌液對尖孢鐮刀菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用在P=0.01水平上高于發(fā)酵液濾液，說明Bs-21的代謝產(chǎn)物可能由多種物質(zhì)組成，且受熱后活性有可能增強。 通過含藥介質(zhì)法測定了Bs-21代謝產(chǎn)物的抑菌活性，結(jié)果表明：Bs-21的發(fā)酵濾液和發(fā)酵高溫滅菌液的不同稀釋比例對三種病原菌菌絲的生長均表現(xiàn)出了一定的抑制作用，且濃度愈高，抑制作用愈強。但對不同病原菌抑制作用差別明顯，對立枯絲核菌菌絲生長抑制作用較弱，在稀釋比例為1:5時，Bs-2

5、1發(fā)酵濾液和發(fā)酵高溫滅菌液對其的抑制率分別為27.49﹪和17.78﹪；而對尖孢鐮刀菌和大麗輪枝菌的菌絲生長抑制作用較強，在稀釋比例為1:5時，Bs-21發(fā)酵濾液對兩者的抑制率分別為48.53﹪和48.92﹪，Bs-21發(fā)酵高溫滅菌液對兩者的抑制率分別為37.33﹪和33.97﹪；同時，Bs-21發(fā)酵濾液對三種病原菌的抑制效果在總體水平上高于Bs-21發(fā)酵高溫滅菌液，但高溫滅菌液仍有較強的活性，說明Bs-21的代謝產(chǎn)物中含有具熱穩(wěn)定性的

6、物質(zhì)。 由于拮抗菌Bs-21對草莓重茬三種病原菌都具有很好的拮抗作用，具有作為生防制劑的潛力，故對其研制為生防菌劑并加以推廣應(yīng)用做出了初步的研究。本研究初步篩選了Bs-21固體發(fā)酵適宜的溫度、初始含水量和pH值條件。研究表明，三種中藥粉末(重量比1:1:1)的混合物與秸桿粉按3:20的比例混合作為固體基質(zhì)，Bs-21以10﹪的接種量接入固體基質(zhì)，34℃、80﹪含水量、初始pH值7.5時，枯草芽孢桿菌Bs-21的繁殖能力最強且活菌