休克腸淋巴液在小鼠心肌組織ACE-ACE2失衡中的作用.pdf

1、背景與目的:失血性休克后心肌收縮功能障礙導致的心泵功能降低是加重微循環(huán)障礙、引起其它器官損傷、導致休克難治甚至死亡的關鍵因素，失血性休克引起的心肌損傷是導致心肌收縮功能障礙的結構基礎。針對腸淋巴途徑與休克后心肌損傷的研究發(fā)現(xiàn)，腸淋巴管結扎可減輕失血性休克大鼠心肌結構損傷、提高心肌收縮功能，結果提示失血性休克后腸淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph，PHSML)回流是加重心肌組織結構損傷、

2、心臟功能障礙的重要因素，其機制有待深入研究。已有的研究顯示，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin-system，RAS)與失血性休克后的微循環(huán)障礙、器官低灌注密切相關;血管緊張素轉換酶(angiotensin converting enzyme，ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)-AngⅡ-1型受體(AngⅡ1 receptor，AT1R)與ACE2-Ang(1-7)-Mas受體(MasR)

3、是RAS的兩條關鍵軸，二者平衡參與了RAS的調(diào)節(jié);ACE/ACE2失衡參與了止血帶性休克腎、肺損傷的發(fā)生。但二者在失血性休克后心肌損傷中的作用如何？未見報道。PHSML引流減輕心肌損傷的作用是否與調(diào)節(jié)ACE/ACE2平衡有關？值得研究。為此，本研究觀察PHSML引流對失血性休克小鼠心肌組織ACE、ACE2、AT1R、Mas1RmRNA表達以及AngⅡ和Ang(1-7)含量的影響，探討PHSML在失血性休克小鼠心肌組織ACE/ACE2失衡

4、中的作用。
　　方法:BALB/c雄性小鼠24只，隨機均分為對照組(control)、假手術組(sham)、休克組(shock)、休克腸淋巴液引流組(shock+drainage)。小鼠經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，shock、shock+drainage組小鼠按我室常規(guī)方法建立失血性休克模型:分離右側股動脈用于全身抗凝和平均動脈血壓(mean artery pressure，MAP)監(jiān)測;分離左側股動脈用于放血;腹部手術，剝離與腸

5、系膜上動脈伴行的腸淋巴管(mesenteric lymph duct，MLD);待所有手術完成、經(jīng)過一個30 min的穩(wěn)定期后，緩慢勻速放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，通過調(diào)整放血量維持在（40±2）mmHg60 min;將放出的全血與林格氏液按1∶1混勻，經(jīng)左側股動脈輸液復蘇，30 min內(nèi)完成;輸液結束后再觀察6h，留取心肌組織，-80℃保存，部分心肌組織用于制備組織勻漿，ELISA方法檢測腎臟組織中AngⅡ和Ang

6、(1-7)含量;部分心肌組織用于提取RNA，應用QRT-PCR法檢測ACEmRNA、ACE2 mRNA、AT1RmRNA、Mas1R mRNA表達。shock+drainage組在輸液結束后，行腸淋巴液引流。Sham組動物僅進行相同的手術操作，但不放血、不輸液，觀察至對shock組相對應的時間。Control組小鼠麻醉后直接用于組織留取。本文數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（mean±SD）或均數(shù)±標準誤(mean±SE)表示，應用SPSS16.0統(tǒng)

7、計軟件包進行統(tǒng)計學處理。
　　結果:首先發(fā)現(xiàn)，Control與sham組的ACE、AT1R的mRNA表達與AngⅡ水平無顯著差異(P＞0.05);Shock組小鼠心肌組織ACE、AT1R的mRNA表達與AngⅡ水平均顯著高于control、sham組(P＜0.05);PHSML引流顯著降低了休克組小鼠心肌組織的ACE、AT1R的mRNA表達與AngⅡ水平(P＜0.05)，但ACE、AT1R的mRNA表達仍高于control、sha

8、m組(P＜0.05)。隨后發(fā)現(xiàn)，sham組小鼠心肌組織的ACE、AT1R的mRNA表達顯著低于control組（P＜0.05），兩組間Ang(1-7)含量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);shock組小鼠心肌組織ACE2、Mas1R mRNA表達水平顯著低于Control與sham組，Ang(1-7)含量顯著低于Control組(P＜0.05);PHSML引流提高了休克小鼠心肌組織ACE2、Mas1R mRNA表達水平以及Ang(1-7)含

9、量(P＜0.05)，但ACE2、Mas1R mRNA表達仍低于Control與sham組(P＜0.05)，Ang(1-7)含量與Control與sham組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。最后，shock組小鼠心肌組織ACE/ACE2、AngⅡ/Ang(1-7)比值顯著高于Control與sham組(P＜0.05); PHSML引流顯著降低了ACE/ACE2、AngⅡ/Ang(1-7)比值，但仍高于Control與sham組(P＜0.05)