休克腸淋巴液在小鼠心肌組織ACE-ACE2失衡中的作用.pdf

1、背景與目的:失血性休克后心肌收縮功能障礙導(dǎo)致的心泵功能降低是加重微循環(huán)障礙、引起其它器官損傷、導(dǎo)致休克難治甚至死亡的關(guān)鍵因素，失血性休克引起的心肌損傷是導(dǎo)致心肌收縮功能障礙的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。針對(duì)腸淋巴途徑與休克后心肌損傷的研究發(fā)現(xiàn)，腸淋巴管結(jié)扎可減輕失血性休克大鼠心肌結(jié)構(gòu)損傷、提高心肌收縮功能，結(jié)果提示失血性休克后腸淋巴液(post-hemorrhagic shock mesenteric lymph，PHSML)回流是加重心肌組織結(jié)構(gòu)損傷、

2、心臟功能障礙的重要因素，其機(jī)制有待深入研究。已有的研究顯示，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin-system，RAS)與失血性休克后的微循環(huán)障礙、器官低灌注密切相關(guān);血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme，ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)-AngⅡ-1型受體(AngⅡ1 receptor，AT1R)與ACE2-Ang(1-7)-Mas受體(MasR)

3、是RAS的兩條關(guān)鍵軸，二者平衡參與了RAS的調(diào)節(jié);ACE/ACE2失衡參與了止血帶性休克腎、肺損傷的發(fā)生。但二者在失血性休克后心肌損傷中的作用如何？未見(jiàn)報(bào)道。PHSML引流減輕心肌損傷的作用是否與調(diào)節(jié)ACE/ACE2平衡有關(guān)？值得研究。為此，本研究觀察PHSML引流對(duì)失血性休克小鼠心肌組織ACE、ACE2、AT1R、Mas1RmRNA表達(dá)以及AngⅡ和Ang(1-7)含量的影響，探討PHSML在失血性休克小鼠心肌組織ACE/ACE2失衡

4、中的作用。
　　方法:BALB/c雄性小鼠24只，隨機(jī)均分為對(duì)照組(control)、假手術(shù)組(sham)、休克組(shock)、休克腸淋巴液引流組(shock+drainage)。小鼠經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，shock、shock+drainage組小鼠按我室常規(guī)方法建立失血性休克模型:分離右側(cè)股動(dòng)脈用于全身抗凝和平均動(dòng)脈血壓(mean artery pressure，MAP)監(jiān)測(cè);分離左側(cè)股動(dòng)脈用于放血;腹部手術(shù)，剝離與腸

5、系膜上動(dòng)脈伴行的腸淋巴管(mesenteric lymph duct，MLD);待所有手術(shù)完成、經(jīng)過(guò)一個(gè)30 min的穩(wěn)定期后，緩慢勻速放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，通過(guò)調(diào)整放血量維持在（40±2）mmHg60 min;將放出的全血與林格氏液按1∶1混勻，經(jīng)左側(cè)股動(dòng)脈輸液復(fù)蘇，30 min內(nèi)完成;輸液結(jié)束后再觀察6h，留取心肌組織，-80℃保存，部分心肌組織用于制備組織勻漿，ELISA方法檢測(cè)腎臟組織中AngⅡ和Ang

6、(1-7)含量;部分心肌組織用于提取RNA，應(yīng)用QRT-PCR法檢測(cè)ACEmRNA、ACE2 mRNA、AT1RmRNA、Mas1R mRNA表達(dá)。shock+drainage組在輸液結(jié)束后，行腸淋巴液引流。Sham組動(dòng)物僅進(jìn)行相同的手術(shù)操作，但不放血、不輸液，觀察至對(duì)shock組相對(duì)應(yīng)的時(shí)間。Control組小鼠麻醉后直接用于組織留取。本文數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）或均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)

7、計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果:首先發(fā)現(xiàn)，Control與sham組的ACE、AT1R的mRNA表達(dá)與AngⅡ水平無(wú)顯著差異(P＞0.05);Shock組小鼠心肌組織ACE、AT1R的mRNA表達(dá)與AngⅡ水平均顯著高于control、sham組(P＜0.05);PHSML引流顯著降低了休克組小鼠心肌組織的ACE、AT1R的mRNA表達(dá)與AngⅡ水平(P＜0.05)，但ACE、AT1R的mRNA表達(dá)仍高于control、sha

8、m組(P＜0.05)。隨后發(fā)現(xiàn)，sham組小鼠心肌組織的ACE、AT1R的mRNA表達(dá)顯著低于control組（P＜0.05），兩組間Ang(1-7)含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);shock組小鼠心肌組織ACE2、Mas1R mRNA表達(dá)水平顯著低于Control與sham組，Ang(1-7)含量顯著低于Control組(P＜0.05);PHSML引流提高了休克小鼠心肌組織ACE2、Mas1R mRNA表達(dá)水平以及Ang(1-7)含

9、量(P＜0.05)，但ACE2、Mas1R mRNA表達(dá)仍低于Control與sham組(P＜0.05)，Ang(1-7)含量與Control與sham組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。最后，shock組小鼠心肌組織ACE/ACE2、AngⅡ/Ang(1-7)比值顯著高于Control與sham組(P＜0.05); PHSML引流顯著降低了ACE/ACE2、AngⅡ/Ang(1-7)比值，但仍高于Control與sham組(P＜0.05)