休克腸淋巴液對(duì)小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞增殖與活化的影響.pdf

1、背景:重癥休克后存在著明顯的免疫功能紊亂，尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，在重癥休克導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemicinflammatory response syndrome，SIRS）及多器官功能障礙綜合征(multipleorgan dysfunction syndrome，MODS)的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。失血性休克后的腸淋巴液回流是休克和惡化的主要因素之一。失血性休克T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)紊亂與腸淋巴液

2、回流的關(guān)系，值得研究。
　　目的:本研究旨在觀察小鼠失血性休克后不同時(shí)期腸淋巴液對(duì)正常小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞增殖以及干擾素(interferon，IFN-γ)、白細(xì)胞介素2（interleukin-2，IL-2）、白細(xì)胞介素4(interleukin-4，IL-4)和腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8樣分子2(tumor necrosis factorα induced protein8 like2，TIPE2)等細(xì)胞因子含量的影響，進(jìn)

3、一步探討腸淋巴液回流在失血性休克后免疫功能紊亂中的作用。
　　方法:應(yīng)用健康SPF級(jí)雄性BALB/C小鼠，復(fù)制失血性休克模型，常規(guī)方法引流休克期腸淋巴液(休克即刻至1h，post-shock mesentericlymph(PSML)）、休克復(fù)蘇后腸淋巴液(休克復(fù)蘇后至3h，post-shock withresuscitation mesenteric lymph(PSRML)）;同時(shí)引流正常小鼠的腸淋巴液（1h，normal m

4、esenteric lymph(NML)）。應(yīng)用免疫磁珠方法分選獲取正常小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞后，分別與4％終濃度的腸淋巴液共孵育。實(shí)驗(yàn)分為NML組、PSML組、PSRML組和空白對(duì)照組（control）;每組又根據(jù)刺激時(shí)間分為3h、6h、12 h和24 h四個(gè)亞組。MTT方法檢測(cè)不同時(shí)期腸淋巴液對(duì)CD4+T細(xì)胞增殖程度的影響;同時(shí)，留取培養(yǎng)上清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-2、 IL-4和

5、TIPE2的含量。
　　結(jié)果:①CD4+T淋巴細(xì)胞增殖情況:NML能夠明顯促進(jìn)CD4+T淋巴細(xì)胞增殖;PSML早期能夠促進(jìn)CD4+T淋巴細(xì)胞增殖，但較正常淋巴液作用弱，后期抑制CD4+T淋巴細(xì)胞增殖;PSRML早期對(duì)CD4+T淋巴細(xì)胞增殖無(wú)明顯作用，后期可刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖，但仍低于NML組。②IL-2含量變化:與對(duì)照組比較，NML組培養(yǎng)上清中IL-2水平明顯升高，且隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng)IL-2水平呈現(xiàn)增高趨勢(shì);PSML作用早

6、期IL-2水平明顯增高，后期下降;PSRML作用6h和24 h明顯增高。與NML組比較，PSML作用12 h時(shí)，IL-2水平高于NML組，作用24 h時(shí)明顯降低，PSRML組作用后期IL-2水平較NML組顯著降低;與PSML組比較，PSRML組作用12h時(shí)IL-2水平較PSML組降低，而作用24 h時(shí)IL-2水平較PSML組增高。③IL-4含量的變化:與control組比較，NML組IL-4的水平呈現(xiàn)降低趨勢(shì);PSML組及PSRML組I

7、L-4水平呈現(xiàn)先降低后增高趨勢(shì);與NML組比較，PSML組及PSRML組IL-4水平隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)先降低后增高趨勢(shì);與PSML組比較，PSRML組IL-4水平于作用24 h明顯降低。④IFN-γ含量的變化:與control組比較，NML組IFN-γ水平明顯增高，且隨著刺激時(shí)間延長(zhǎng)不斷增高;PSML刺激6h、12 h IFN-γ水平顯著性升高，刺激24 h時(shí)IFN-γ水平降低;PSRML刺激24 h IFN-γ水平升高;與NML組比較，

8、PSML刺激3h及24 hIFN-γ水平降低，PSRML刺激后各時(shí)間點(diǎn)IFN-γ水平均呈現(xiàn)降低趨勢(shì);與PSML組比較，PSRML刺激6h、12 h IFN-γ水平降低，刺激24 h時(shí)IFN-γ水平明顯增高。⑤TIPE2含量的變化:與control組比較，NML組在作用后6h及24 h TIPE2水平呈現(xiàn)增高趨勢(shì);PSML組TIPE2水平于作用后12 h降低，其余各時(shí)間點(diǎn)均升高;PSRML組TIPE2水平在刺激24 h時(shí)呈現(xiàn)增高趨勢(shì);與N