硫氧還蛋白及超氧化物歧化酶在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)及作用.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)是一種病因尚不十分清楚的結(jié)腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病，病變局限于大腸黏膜及黏膜下層。病變多位于乙狀結(jié)腸和直腸，也可延伸至降結(jié)腸，甚至整個(gè)結(jié)腸。病程漫長(zhǎng)，常反復(fù)發(fā)作。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要認(rèn)為是外源物質(zhì)引起宿主反應(yīng)、基因和免疫影響三者相互作用的結(jié)果。近年研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體氧化應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生的大量氧自由基對(duì)結(jié)腸粘膜細(xì)胞的損傷作用是其發(fā)病的重要機(jī)制之一，而硫氧還蛋白(thioredoxin，T

2、RX)及超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)則是參與機(jī)體氧化應(yīng)激的重要相關(guān)蛋白。TRX不但可作為氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，還具有強(qiáng)大的清除體內(nèi)過(guò)氧化物的功能，能保護(hù)細(xì)胞免受如腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)以及過(guò)氧化氫(Hydrogen Peroxide，H2O2)等的損傷，此外TRX還能調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子以及其它炎癥因子的活性，在病毒感染、缺血損傷的應(yīng)激條件下對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。SO

3、D是一種新型酶制劑，是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，廣泛分布于各種生物體內(nèi)。SOD能有效地清除氧自由基，催化超氧化自由基分解成H2O2，進(jìn)一步在過(guò)氧化氫酶的作用下分解成H2O和氧分子，從而抑制腸組織中的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，并能穩(wěn)定細(xì)胞膜。SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，也是反映細(xì)胞膜功能和機(jī)體抗炎癥反應(yīng)的主要指標(biāo)。
　　關(guān)于TRX及SOD在UC發(fā)病中的研究，國(guó)內(nèi)研究較為少見(jiàn)，國(guó)外研究也僅僅限于動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究。本研究擬采

4、用Western blot、PCR技術(shù)以及免疫組化染色分析，分別從蛋白水平和mRNA水平檢測(cè)UC患者腸粘膜組織中TRX及SOD的表達(dá)水平，探討TRX及SOD在UC發(fā)病中的作用機(jī)制，從而為UC的診斷和治療提供新的線(xiàn)索。
　　目的:本課題通過(guò)檢測(cè)硫氧還蛋白及超氧化物歧化酶在UC患者中的表達(dá)，探討其在UC發(fā)病機(jī)制中的作用，從而為UC的診斷和治療提供新的線(xiàn)索。
　　方法:病例選自2013年10月至2014年9月就診于滄州市中心醫(yī)院消

5、化內(nèi)科診斷證實(shí)為UC患者共42例，同時(shí)選擇腸鏡及病理證實(shí)結(jié)腸組織為正常者13例為正常對(duì)照組。入選病例根據(jù)Sutherland DAI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，將其分為輕中度活動(dòng)組(n=23例)及重度活動(dòng)組(n=19例)。各組間在年齡及性別等方面均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。采用免疫組織化學(xué)染色方法、Western blot以及PCR技術(shù)，分別從蛋白水平和基因水平檢測(cè)UC患者結(jié)腸粘膜組織中TRX及SOD的表達(dá)水平，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。根據(jù)TR

6、X及SOD表達(dá)中位數(shù)為分隔點(diǎn)，將其分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，研究降鈣素原(procalcitonin，PTC)、C反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein，CRP)及臨床參數(shù)與其相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1、研究對(duì)象結(jié)腸鏡檢查結(jié)果及病理特征
　　1.1結(jié)腸鏡檢查可見(jiàn):正常人結(jié)腸黏膜表面光滑完整，血管紋理清晰;潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜粗糙，呈細(xì)顆粒狀改變，血管紋理模糊，覆有膿性或血性分泌物;有彌漫性糜爛和多發(fā)性淺潰瘍形

7、成;假息肉及橋狀粘膜，結(jié)腸袋變鈍或消失。
　　1.2光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn):正常人結(jié)腸組織黏膜腺體排列整齊，上皮完整，黏膜固有層可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜染色過(guò)淺、空泡形成、杯狀細(xì)胞減少或消失，伴有大量圓細(xì)胞或中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體萎縮甚至壞死，并呈不同程度糜爛、隱窩膿腫及水腫形成。
　　2、TRX及SOD在UC患者結(jié)腸組織中的表達(dá)
　　2.1 UC患者結(jié)腸組織TRX及SOD mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　

8、輕中度組UC患者結(jié)腸組織中TRX mRNA含量略高于正常組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;重度組TRX mRNA表達(dá)明顯高于輕中度組及正常組(P＜0.001);輕中度組UC患者結(jié)腸組織中SOD mRNA表達(dá)與正常對(duì)照組無(wú)明顯差異，重度組UC患者SOD mRNA表達(dá)顯著低于輕中度組及正常組。
　　2.2 UC患者組織TRX及SOD蛋白表達(dá)水平。
　　輕中度組UC患者結(jié)腸組織中TRX蛋白含量略高于正常組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;重度組TRX蛋白表達(dá)明

9、顯高于輕中度組及正常組（P＜0.05）;輕中度組UC患者SOD蛋白表達(dá)稍高于正常對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;重度組UC患者SOD蛋白表達(dá)顯著低于輕中度組及正常組(P＜0.001)。
　　3、免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TRX在UC患者組織的表達(dá)
　　染色顯示:TRX的主要表達(dá)于上皮細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。UC患者的結(jié)腸黏膜炎性細(xì)胞大量浸潤(rùn)，伴有不同程度的組織結(jié)構(gòu)破壞，TRX表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞較正常黏膜明顯增多且染色較深。重度組TRX

10、表達(dá)水平明顯高于輕中度組及正常組(P＜0.05);輕中度組明顯高于正常組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4、血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白及臨床參數(shù)與TRX及SOD的相關(guān)性分析
　　血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白在TRX高表達(dá)組的潰瘍性結(jié)腸炎患者中含量明顯高于TRX低表達(dá)組;血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白在SOD高表達(dá)組的潰瘍性結(jié)腸炎患者中含量低于SOD低表達(dá)組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;大便次數(shù)、發(fā)熱、貧血等臨床參數(shù)與TRX及SOD的表達(dá)均無(wú)