雞馬立克氏病發(fā)病過程中HSP60表達(dá)和mRNA轉(zhuǎn)錄的動態(tài)變化及其相關(guān)性研究.pdf

1、熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是組織細(xì)胞在應(yīng)激因素刺激下所產(chǎn)生的一組高度保守的蛋白家族，它不僅在機(jī)體各種應(yīng)激狀態(tài)下會過量表達(dá)，在某些腫瘤組織中也會出現(xiàn)異常表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、耐藥機(jī)制及與腫瘤相關(guān)的免疫反應(yīng)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而作為重要代表成員之一的HSP60，對其在腫瘤發(fā)病學(xué)中的表達(dá)和作用的研究則較少，尤其在禽腫瘤性疾病中的研究國內(nèi)尚未見報(bào)道?；谝陨媳尘埃狙芯咳?日齡SPF雛雞分

2、為MDV-RB1B病毒接種組，HVT疫苗免疫組及無感染、無免疫空白對照組，3組均依次接種ND+H9 AI滅活和ND弱毒疫苗，成功建立雞MD腫瘤模型。各組定期采外周血通過HA/HI方法測定血清中ND和H9 AI的抗體滴度，反映MDV引起的免疫抑制情況，ELISA方法檢測血清中HSP60抗體含量的動態(tài)變化;定期剖殺采集主要器官組織，制作石蠟切片，HE染色以觀察組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測HSP60在各器官組織中的分布，ELISA檢測

3、組織內(nèi)HSP60含量的動態(tài)變化，實(shí)時(shí)FQ RT-PCR技術(shù)定量檢測組織內(nèi)HSP60 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。分析在腫瘤發(fā)病機(jī)體內(nèi)HSP60在核酸及蛋白水平上的變化規(guī)律，探討其變化與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究HSP60在腫瘤發(fā)病學(xué)中的作用奠定基礎(chǔ)，同時(shí)也為動物腫瘤病的診斷和新型治療藥物的研發(fā)提供新思路。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)成功建立了MD動物腫瘤模型，病毒株感染后，自21日齡起各內(nèi)臟器官先后出現(xiàn)灰白色或黃白色腫瘤結(jié)節(jié)，

4、病理組織學(xué)檢查腫瘤組織為多形態(tài)淋巴樣細(xì)胞;MDV感染迅速導(dǎo)致機(jī)體的持續(xù)性免疫抑制，攻毒組在21～42日齡檢測血清中ND抗體滴度顯著低于對照組(P＜0.05)，在14～42日齡檢測H9 AI的抗體滴度始終極顯著低于對照組。攻毒組血清中HSP60的抗體水平始終高于兩對照組，28～86日齡間差異達(dá)極顯著水平(P＜0.01); HSP60在試驗(yàn)雞體內(nèi)各組織器官瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)均呈強(qiáng)陽性表達(dá)，在瘤灶外僅肝臟和腎臟組織細(xì)胞的胞漿中有少量陽性表達(dá);在試驗(yàn)

5、期內(nèi)攻毒組各組織內(nèi)HSP60的表達(dá)量、mRNA轉(zhuǎn)錄水平均始終高于兩對照組，不同組織呈顯著或極顯著性差異，但HSP60的表達(dá)量與mRNA轉(zhuǎn)錄水平之間未呈一致的對應(yīng)關(guān)系。
　　 本研究結(jié)果表明:MDV-RB1B病毒株感染可引起速發(fā)性內(nèi)臟型MD腫瘤，會顯著抑制ND和H9AI的免疫反應(yīng);在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，血清內(nèi)HSP60抗體水平升高，腫瘤病灶及周圍組織內(nèi)HSP60的表達(dá)量增加，HSP60mRNA轉(zhuǎn)錄水平也相應(yīng)增加;HSP60表達(dá)量同