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1、 本研究選用CVI988疫苗作載體,插入IBDVVP2保護(hù)性抗原基因,篩選重組病毒,并對(duì)其免疫特性進(jìn)行了研究。1IBDVJS株VP2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫特性 本研究用RT PCR方法從IBDY JS株中擴(kuò)增出YP2基因,序列測(cè)定結(jié)合致病性,實(shí)驗(yàn)證明,IBBV JS株是一株超強(qiáng)毒株;用構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1 -VP2免疫雛雞,能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗VP2抗體,對(duì)IBDV強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)率為67﹪;構(gòu)建了含eGFP報(bào)告
2、基因的轉(zhuǎn)移載體pUC18-US10-eGFP,通過(guò)與活病毒同源重組,獲得了表達(dá)eGFP的rCV1988-US10-eGFP,經(jīng)多次傳代證明rCVI988-US10-eGFP在感染的CEF細(xì)胞中能穩(wěn)定表達(dá)eGFP,且其形態(tài)和生長(zhǎng)特性與親本毒株一致;構(gòu)建了含eGFP-VP2融合基因的轉(zhuǎn)移載體pUC18-US10-eGFP-VP2,通過(guò)與活病毒同源重組,獲得了穩(wěn)定表達(dá)eGFP-VP2融合蛋白的重組病毒rCVI988-eGFP-VP2;構(gòu)建了含
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