雞馬立克氏病流行與防控

1、中國農(nóng)業(yè)科學院-哈爾濱獸醫(yī)研究所深圳2014年4月29日,雞馬立克氏病流行及防控,劉 長 軍,雞馬立克氏病,1907發(fā)現(xiàn)--1961-病原-MDV、命名--中國-70年代主要感染雞和火雞淋巴細胞的溶細胞感染和T-細胞淋巴瘤最早出現(xiàn)在3-4周，高峰在12-30周年齡易感性--日齡越小易感性越高-- 1日齡雛雞比10日齡以上雛雞易感性高幾百倍水平傳播--羽毛囊上皮細胞--復制病毒--長期排毒--通過空氣傳播發(fā)病率-- 5%～

2、30%,Map of the evolution of MD incidence. Colors represent the current existence of MD outbreaks as followed: red=current MD outbreaks; yellow=no current MD outbreaks; grey=data not available. The existence of MD outbre

3、aks during 1990s is indicated by vertical stripes,秘魯,俄羅斯,尼日利亞,摩洛哥,葡萄牙,中國,雞馬立克氏病導致臟器腫瘤及神經(jīng)腫瘤,馬立克氏病引起免疫器官萎縮,胸腺,法氏囊,對照 vv vv+,Introduction,馬立克氏病病原-----MDV,MDV屬于α皰疹病毒科、馬立克氏病病毒屬。MDV粒子由核芯、

4、核衣殼、被膜和囊膜組成，在感染細胞內(nèi)可見直徑為85-160 nm的六邊形裸露顆粒即核衣殼。偶爾也能見到150-160 nm的有囊膜的病毒粒子；基因組為雙股線性DNA長度約為166-180Kb 。,,MDV分類,Introduction,MDV的復制,早期溶細胞感染潛伏感染第二次溶細胞感染腫瘤增生-產(chǎn)生成熟病毒粒子,早期溶細胞感染,MDV在羽毛囊上皮細胞中的復制,淋巴器官 神經(jīng)組織、羽毛囊上皮

5、腫瘤,新特點,宿主范圍擴大—火雞感染發(fā)病混合感染—REV、ALV（雞病毒重組-LTR的插入）；NDV；細菌；霉菌毒力增強—突破不同MD疫苗的保護作用急性發(fā)病癥狀—3-4周齡即開始出現(xiàn)腫瘤，8-9周齡時已很嚴重，并能在3周齡引起特別嚴重的短暫麻痹，從而導致很高的死亡率 不同日齡雞感染性—Rosenberg等，注射和同居接觸19、34 和49日齡的SPF雞，出現(xiàn)臨床發(fā)病和腫瘤病變,Introduction,MDV毒力進化,MDV毒力

6、越來越強：m—溫和型、v—強毒力型、vv —超強毒力型、vv+ —超超強毒力型,臨床癥狀由主要是慢性多發(fā)性神經(jīng)炎轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟l(fā)性神經(jīng)炎和內(nèi)臟淋巴瘤 、內(nèi)臟淋巴瘤、神經(jīng)癥狀、嚴重的腦水腫和急性死亡,國內(nèi)MD發(fā)病情況--黑龍江病例（多發(fā)性腫瘤）,圖1 ，2， 3分別為牡丹江地區(qū)病料（瘤化的卵巢、腸系膜和脾臟）。圖4，5分別為大慶地區(qū)病料（瘤化的卵巢和腫大的肝臟）,青腳黃雞3/3MD+， 1/3只AL+,270日齡，900只 海蘭褐，病死近1

7、00只，,吉林省病例（多發(fā)性腫瘤）圖1為發(fā)病雞，2和3為系膜瘤，4為肝臟瘤。,長春，8/11 MD+，5000只，至110日齡，死1000,遼寧省病例（混感） 圖1為肌肉瘤， 2為瘤化的腺胃， 3為瘤化的肝臟。,4萬套，海蘭褐蛋種雞，110日齡發(fā)病，A亞群ALV 9/11 AGP-2/11，MD+，PCR-3/8MD+ 公雞40%A亞群,江蘇病例（烏雞和麻雞）腎臟腫,,40和60日齡，10

8、%,山東,110日齡，10000只，發(fā)病20-30%，9/10 MD+,腺胃腫瘤化為特征的病例,大連,沈陽,腺胃腫瘤化為特征的病例,哈爾濱,牡丹江,脾臟腫瘤,2011 -2013年MDV流行病學檢測,---我國MDV呈經(jīng)常性、普遍性散發(fā)狀態(tài),省 雞場 病料 陽性雞場 陽性病料 陽性率,,,MDV與REV、ALV和CAV的混合感染（2011 -2013）,---混合感

9、染是常見現(xiàn)象,MDV分離毒株特性,注：NA表示未知，“—”表示未檢測。,MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）符合強、弱毒的分子特征,177bp,10株MDV分離毒株對SPF雞的致病性,MDV流行毒株對雞具有高致病性,5株MDV分離毒株對免疫雞（CVI988疫苗）的致病性,---MDV致病性增加；現(xiàn)有疫苗對某些毒株不能提高完全保護。,MDV與REV混感和分子重組,一個混感感染病例 2011年某雞場商品蛋雞，40日齡開

10、始發(fā)病。癥狀--腺胃炎，腺胃腫；雞瘦??；有死亡；無明顯腫瘤。送檢雞--52日齡。檢測結(jié)果—MDV+、REV+,電鏡,負染,切片,,,MDV,REV,存在MDV和REV病毒粒子,----高發(fā)病率、高致死率、高腫瘤率；突破疫苗保護.,致病性,分離株攻毒 -腺胃MDV腫瘤特征,腫瘤組織病理學觀察,組織上以多形態(tài)的淋巴細胞增生浸潤為基礎(chǔ)，包括小型、中型和大型淋巴細胞。即，細胞的大小不一，形態(tài)各異。細胞核淡明，核仁大

11、而明顯。浸潤范圍廣泛，取代原來的正常組織（腺胃）。腺胃的腫瘤細胞可見多數(shù)的異常核分裂像。同時可見腫瘤細胞的壞死（核濃縮）,CVI988-分離株組,-----腫瘤的差異REV腫瘤特征,腫瘤細胞為成淋巴細胞。細胞大小均一，細胞核淡明，核仁1-數(shù)個。細胞漿淡染，細胞界限不明顯。未見核分裂像。腫瘤細胞呈占位性，呈局灶性浸潤。腫瘤組織病灶通常呈圓形或類圓形。未見腫瘤細胞凋亡和壞死。,背景：反轉(zhuǎn)錄病毒—REV在皰疹病毒MDV基因組中的插入,

12、重組基礎(chǔ)混合感染現(xiàn)象---商業(yè)雞群---多致瘤病毒共感染共同的宿主---淋巴細胞和相同的微環(huán)境，MDV-感染B和T淋巴細胞，轉(zhuǎn)化T；ALV引起骨髓細胞轉(zhuǎn)化MDV和ALV都在成纖維細胞中復制，ALV胸腺，法氏囊中復制；REV，淋巴細胞或網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞，成纖維細胞中復制反轉(zhuǎn)錄病毒為了自身復制，可以整合到任何雙鏈DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）,細胞中相同的復制位置,REV在MDV基因組中的插入驗證Hot-Spot

13、 PCR（REV和MDV上下游交叉引物檢測，病毒重組的驗證）,MDV pBAC-C全基因組序列,IRs區(qū)插入的相對位置（MDV Md5）,,,,,,,,LTR,MDV086（細胞質(zhì)蛋白）,MDV085 （預測蛋白）,MDV083（反義RNA蛋白）,MDV084 （ICP4）,,,,MDV087 （MDV1 S2 ）,MDV088 （ICP22）,MDV089 （Us10 ）,,IRs區(qū),TRs區(qū)

14、插入的相對位置（MDV Md5）,,,LTR,,MDV097 （MDV1 S2 ）,,,MDV096 （gE ）,,MDV095 （gI ）,,MDV098 （細胞質(zhì)蛋白）,,MDV099 （預測蛋白 ）,,MDV101 （反義RNA蛋白）,,MDV100 （ICP4 ）,,TRs區(qū),插入重組的意義：反轉(zhuǎn)錄病毒是混亂宿主和皰疹病毒遺傳物質(zhì)的元件之一。這種重組可能改變MDV的組織趨向性、傳

15、播方式、致病性、疫苗保護性---MDV的進化？,MDV meq序列-88株，測定序列-63株（2006-2013）參考序列-25株（中國分離毒株-11株，國外毒株-14株）我們測的63株中除了3株位于弱毒分支外，其他的60株位于一個獨立進化分支（不同于國外的毒株）。,MDV meq,我國MDV流行毒株處于一個獨立的進化分支,,,,A： MDV毒株的長重復區(qū)遺傳進化樹,B：MDV毒株的短重復區(qū)遺傳進化樹,,,15株MDV（

16、全基因組）分子進化,,,,,MD的防控,防止雛雞MDV野毒早期感染控制混感---重組、加重MD？免疫特點---非清除性抗腫瘤免疫、占位干擾作用---超感染和超感染抑制？---控制傳播疫苗---毒株？---感染程度？免疫劑量二次免疫,控制污染源 - 抗病力 - 免疫,MD疫苗株的應(yīng)用,Four generations of MD Vaccines:致弱的血清1型毒株(1970)HVT (197

17、0s)雙價苗HVT+ SB1 (1983)CVI988 (Rispens株) (1990s)，“814”株,我國MD疫苗使用情況,曾經(jīng)使用的疫苗： HVT、CVI988、“814”、HVT+SB1、HVT+Z4、HVT+SB1+“814”、 CVI988+ HVT,當前主要使用的疫苗：種雞、蛋雞-CVI988、“814”、HVT、CVI988+ HVT 肉雞-主要為HVTHVT-IBDV-VP2---“立克法”

18、“威力克”,814弱毒疫苗種毒株的建立,策略：自然弱毒中篩選、建立---弱毒疫苗種毒株優(yōu)點---安全性好、穩(wěn)定性好和免疫效力好。黑龍江省牡丹江（白洛克和來航）---多年沒有發(fā)生MD--毒株培育：K株---DEF、CES；---“814” S株---DEF、QEF--毒株血清型和致病性：血清1型，自然弱毒株,安全性：（1）接種雞12個月-（2）回歸易感雞10代免疫原性：實驗

19、室免疫攻毒（J-1株）K株的KC25和45代（穩(wěn)定性）--PI：88.9傳代特點:1.KC50-非融合細胞---50-120代也很少見2.病毒粒子的數(shù)量較多-幾乎每個細胞都有病毒粒子3.容易見到---有囊膜的完全病毒粒子母源抗體干擾---HVT、“814”免疫雞群,MD疫苗“814”株---凈化凈化必要性---強細胞嗜性---禽源RNA病毒、支原體污染---免疫失敗的主要原因之一 ---MDV 814病毒