鎘對小鼠睪丸間質細胞毒性作用的分子機制研究.pdf

1、目的：以體外培養(yǎng)小鼠睪丸間質細胞系 TM3細胞為模型，研究鎘對 TM3細胞的毒性作用，進而探討鎘對TM3細胞毒作用的分子機制。
　　方法：(1)給予不同濃度的CdCl2(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理TM3細胞，分別孵育不同時間(4h,8h,12h,16h,24h)，采用CCK-8法檢測各組細胞活力。
　　(2)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)后收集細胞及上清液，采用ELIS

2、A法測定細胞上清液中睪酮的水平，采用western blot和RT-PCR法檢測睪酮合成通路關鍵酶蛋白和mRNA的表達水平。
　　(3)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)后收集細胞，采用western blot和RT-PCR法檢測氧化應激相關蛋白和mRNA的表達水平。
　　(4)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)后收集細胞，采用western blot和RT-PCR法檢

3、測內(nèi)質網(wǎng)應激相關蛋白和mRNA的表達水平。
　　結果：(1)不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理4h后，5μM、10μM和20μM組細胞的存活率與同一時間點對照組比較沒有差異，40μM組細胞的存活率明顯低于同一時間點對照組(p<0.01)；不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理8h后，5μM組細胞的存活率與同一時間點對照組比較略有降低，10μM、20μM和40μM組細胞的存活率

4、與同一時間點對照組明顯降低(p<0.01)；不同濃度的鎘(0μM,5μM,10μM,20μM,40μM)處理12h、16h、24h后，各處理組細胞的存活率均低于同一時間，并具有明顯的劑量效應關系(p<0.01)。
　　(2)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)，鎘處理組細胞上清睪酮含量明顯低于對照組睪酮含量(p<0.01)；鎘處理組TM3細胞的StAR、P450scc和17β-HSD mRNA的表達水平與

5、對照組比降低(p<0.05, p<0.01)，且顯著下調(diào)鎘處理組TM3細胞StAR、P450scc、3β-HSD、P45017α和17β-HSD的蛋白的表達水平(p<0.05, p<0.01)。
　　(3)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)，顯著誘導鎘處理組TM3細胞HO-1蛋白和mRNA的表達水平，并具有明顯的時間效應關系(p<0.01)；然而鎘處理對TM3細胞HO-2的蛋白表達沒有明顯的影響；鎘處理

6、8h組SOD1、SOD2、SOD3、GSH-Px及CAT的mRNA表達水平與對照組的差異均具有統(tǒng)計學意義(p<0.05, p<0.01)。
　　(4)給予20μM CdCl2處理TM3細胞不同的時間(4h,8h)，顯著性上調(diào)鎘處理組內(nèi)質網(wǎng)分子伴侶GRP78蛋白和mRNA的表達，具有明顯的時間效應關系(p<0.01)；此外，鎘顯著誘導GRP94 mRNA表達，也具有明顯的時間效應關系(p<0.05, p<0.01)，提示ATF6信號

7、通路被激活。鎘處理顯著誘導TM3細胞PERK蛋白的磷酸化水平(p<0.01)；鎘處理明顯增加TM3細胞eIF2α蛋白的磷酸化水平，具有時間效應關系(p<0.05, p<0.01)；此外，CHOP的蛋白表達水平在鎘處理組也明顯增加，并且隨鎘處理的時間延長，誘導作用更加明顯(p<0.01)，提示PERK信號通路被激活。鎘處理誘導TM3細胞IRE1α蛋白的磷酸化水平，具有明顯的時間效應關系(p<0.05, p<0.01)；此外，鎘處理組JNK