自噬在鎘致大鼠神經細胞毒性中的作用及調控機制.pdf

1、自噬在鎘致大鼠神經細胞毒性中的作用及調控機制Theroleandregulationmechanismofautophagyinrat’Sneuronsinjuredbycadmium研究生：王棋文導師：劉宗平教授學科專業(yè)：臨床獸醫(yī)學資助項目：國家自然科學基金(31101866。31302058)揚州大學2014年6月揚州大學博士學位論文數陽性細胞，處理組與對照組差異極顯著(pO01)；吖啶橙染色表明，正常細胞顯示了較少的紅色熒光，經鎘

2、處理后的細胞內紅色熒光強度明顯增加；MDC染色揭示，對照組MDC熒光較弱，20gmol／L鎘處理4h，MDC熒光信號逐漸增強，并有熒光積聚斑點；透射電鏡結果表明，20gmol／L鎘處理4h，兩種細胞出現了典型的自噬體，處理24h，染色質開始在核周邊積聚，胞質空泡化。提示鎘可以誘導兩種細胞發(fā)生自噬和凋亡。3啟噬在鎘致神經細胞損傷中的作用為了揭示自噬在鎘致神經細胞毒性損傷中的作用，本研究利用鎘單獨或聯合自噬的特異性抑制劑羥氯喹(CQ)作用4

3、h，或聯合誘導劑雷帕霉素(RAP)作用24h，對PC12細胞和原代神經細胞LC3表達的影響，MTT法測定了CQ和RAP對兩種細胞活性的影響。結果表明，聯合應用CQ，與4h鎘處理組比較，兩種細胞LC3II的蛋白表達量顯著上升(p005)，但細胞活力都有明顯下降(p005或P001)；聯合應用RAP作用24h，與24h鎘處理組比較，兩種細胞LC3II的蛋白表達量顯著上調(p005或PO01)，同時細胞活力顯著上升(p005或P001)。表明

4、自噬在鎘引起的細胞損傷中起保護作用。4鎘誘導神經細胞自噬和凋亡的關系為了探討鎘誘導神經細胞自噬與凋亡的相互關系，本研究利用鎘單獨或聯合CQ作用4h，或聯合RAP或caspase抑制劑ZVADfmk作用24h，流式細胞術檢測PC12細胞凋亡率的變化，DAPI熒光染色觀察原代神經細胞細胞核的變化。結果表明：與對照組比較，鎘作用24h，PC12細胞凋亡率從45％增加到458％，差異性極顯著(p001)，鎘聯合caspase抑制劑ZVADfmk

5、作用24h，細胞凋亡率明顯降低，與鎘24h比較，差異性極顯著(p001)，進一步說明鎘可以誘導PC12細胞發(fā)生凋亡。與鎘4h組比較，鎘聯合CQ作用4h，細胞凋亡率111％增加到337％，差異性極顯著(pO01)；與鎘24h組對比，鎘聯合RAP作用24h，凋亡率從458％降至147％，差異性極顯著(PO01)。與正常原代神經細胞比較，20gmol／L鎘處理24h組出現染色質固縮、核碎裂：鎘聯合CQ作用4h，損傷的細胞增多，出現新月狀、濃縮

6、的胞核，甚至出現核碎裂；而鎘聯合RAP或ZVADfmk組，細胞的損傷明顯減輕。說明鎘誘導的自噬可以延遲凋亡的發(fā)生。5classIIIP13K／Beclin1／Bcl一2通路在鎘誘導神經細胞自噬中的作用為研究classIIIP13K／Beclin1／Bcl2通路在自噬中的作用，20gmol／L鎘分別作用PC12和原代神經細胞0、2、4、6、8、12、24h，免疫印跡法檢測相關蛋白的表達，加入P13K抑制劑LY2940026h后，觀察相關蛋