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文檔簡介
1、中藥藥效物質研究是中藥現代化進程重要內容。由于中藥成分復雜,從中藥混合物中篩選發(fā)現藥效物質具有一定難度。本文建立了分子水平篩選與活體篩選相結合的中藥活性成分篩選方法,著重研究了基于小分子化學探針和斑馬魚模型的3種中藥活性物質篩選方法。
本論文研究內容主要包括:
1.建立了一種基于聚集誘導發(fā)光(AIE)效應探針的SIRT3調節(jié)劑篩選方法。設計了基于AIE效應的小分子探針,由一個作為熒光發(fā)色基團的四苯基乙烯(TPE),與
2、SIRT3酶能夠識別的底物多肽Gln-Lys(Ac)-Arg-Phe-Asn通過固相合成得到。通過對體外反應體系的pH、緩沖鹽濃度、探針濃度等因素的優(yōu)化,該探針能夠在體外特異性檢測SIRT3活性,并具有較低的檢測限。有望用于中藥中SIRT3調節(jié)劑篩選。
2.建立了一種基于花生四烯酸誘導斑馬魚血栓模型的中藥活性物質篩選方法,并用于丹紅注射液活性成分篩選與質量評價。采用鄰聯茴香胺對斑馬魚心臟與尾部紅細胞染色并獲取血栓的顯微圖像,以
3、心臟紅細胞強度為指標評價血栓形成情況。結果表明,該模型能夠較準確地評價陽性藥阿司匹林的抗血栓活性。運用該方法評價了丹紅注射液的抗血栓活性,發(fā)現丹紅注射液能劑量依賴性地減輕花生四烯酸誘導的斑馬魚血栓,丹參與紅花提取物也有較好抗血栓活性。篩選出丹紅注射液中迷迭香酸、對香豆酸等抗血栓活性成分,進一步結合對丹紅注射液中化合物含量分析,發(fā)現迷迭香酸和對香豆酸可作為丹紅注射液抗血栓活性相關質量標志物。并且該方法有望用于批次一致性評價。
3
4、.建立了一種基于化學探針與斑馬魚血瘀血虛模型相結合的中藥活性多重評價方法。對綠色熒光蛋白(GFP)標記血紅蛋白的轉基因斑馬魚用苯肼損傷,通過熒光成像獲取血液流動情況來定性表征血瘀血虛證型。采用小分子探針NP3特異性地原位檢測斑馬魚體內過氧化亞硝酸鹽ONOO-,以探針熒光強度來描述斑馬魚氧化應激損傷和炎癥程度,通過流式細胞術檢測GFP標記的紅細胞強度并以此為指標來評價血瘀血虛情況,實現了雙重活性指標檢測。運用該方法評價了丹紅注射液及丹參、
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