活體高通量篩選抑制斑馬魚中性粒細胞遷移的中藥.pdf

1、目的:建立由綠色熒光蛋白(EGFP)標記中性粒細胞和中性粒細胞遷移、聚集的轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型（MPO-EGFP）[1]，應用此模型篩選出能夠抑制中性粒細胞向急性損傷部位遷移、聚集的中藥。
　　方法:應用分子克隆等技術建立由綠色熒光蛋白標記中性粒細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(MPO-EGFP)。用無菌手術刀切割斑馬魚尾部的方法，制造急性炎癥疾病模型，誘導中性粒細胞向急性損傷部位遷移，并在熒光顯微鏡下觀察損傷部位并對遷移的中性粒細胞數(shù)量進行計數(shù)。

2、以此急性炎癥疾病模型為基礎，篩選能夠抑制中性粒細胞遷移、聚集的中藥。
　　結(jié)果:在斑馬魚急性炎癥疾病模型的基礎上，對302種中藥的抑制作用進行篩選，結(jié)果表明，3＃、28＃、35＃三種乙醇提取藥物能夠明顯抑制轉(zhuǎn)基因斑馬魚急性損傷炎癥反應后中性粒細胞遷移，且抑制作用呈一定程度的藥物劑量依賴性，此外，三種藥物乙醇提取物之間存在中性粒細胞抑制的協(xié)同作用，表現(xiàn)為3＃藥物的乙醇提取物同其他兩種藥物乙醇提取物能協(xié)同抑制中性粒細胞向損傷部位的遷移

3、、聚集。
　　結(jié)論:1、運用分子克隆等分子技術成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白標記斑馬魚中性粒細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚(MPO-EGFP);
　　2、用無菌手術刀切割MPO-EGFP斑馬魚尾部的方法，成功構(gòu)建了誘導中性粒細胞向急性損傷部位遷移的急性炎癥疾病模型;
　　3、成功篩選出3種抑制中性粒細胞向急性損傷部位遷移的中藥;
　　4、3種中藥對MPO-EGFP斑馬魚中性粒細胞向損傷部位遷移的抑制作用存在劑量依賴性;
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