表面增強(qiáng)拉曼信號放大生物傳感方法在生物活性分子檢測中的應(yīng)用.pdf

1、在腫瘤等重大疾病生物檢測方面，蛋白質(zhì)以及核酸都是非常重要的生物分子標(biāo)記物，而在疾病早期這些生物分子的含量很低，難以檢測。建立高靈敏高選擇性的生物分子標(biāo)記物的檢測手段，對于疾病的早期診斷和治療方面將有很大的幫助。本文結(jié)合納米金生物條碼放大技術(shù)，采用表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)，構(gòu)建了雙前體自產(chǎn)生聚合酶剪切循環(huán)、對稱信號放大同時檢測以及不對稱信號放大同時檢測方法，實(shí)現(xiàn)了對血小板衍生因子PDGF-BB、癌癥標(biāo)記物miRNA-203和ATP生物活性分子的高

2、靈敏高選擇性檢測。本工作主要包括以下三個方面：
　　1、根據(jù)適體與靶分子特異性識別的特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一種基于前體自產(chǎn)生的聚合酶鏈取代放大拉曼信號檢測PDGF-BB的方法，該方法根據(jù)PDGF-BB適體的特殊結(jié)構(gòu)，當(dāng)適體與靶分子結(jié)合后，可形成發(fā)夾DNA結(jié)構(gòu)，同時與適體互補(bǔ)的DNA鏈解旋后自動形成另一條發(fā)卡DNA鏈，兩條發(fā)夾DNA的一端以自身為模板，進(jìn)行聚合酶鏈取代循環(huán)放大反應(yīng)，釋放大量的單鏈DNA，進(jìn)而引發(fā)下一步的聚合酶鏈取代循環(huán)放

3、大反應(yīng)，最后在作為基底的金片上固定了大量的納米金生物條碼，以達(dá)到再次放大信號的作用，從而提高檢測的靈敏度，其檢測限為0.42pM。該方法易于操作，具有良好的選擇性和靈敏性，為蛋白質(zhì)等生物活性小分子的檢測提供了新的思路。
　　2、miRNA-203和ATP是癌癥診斷的重要生物分子，我們設(shè)計(jì)了一種對稱信號放大同時檢測的方案，通過雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)以及生物條碼技術(shù)二次放大檢測信號，制備了一種雙功能生物分子拉曼探針同時檢測miR-203和ATP

4、分子，該方法利用磁珠作為載體，將含有兩種分子識別鏈的DNA鏈及其互補(bǔ)鏈固定在磁珠上，當(dāng)兩種分子存在時，分別與識別鏈發(fā)生特異性綁定，同時將兩種引發(fā)鏈釋放到體系中，進(jìn)而引發(fā)下一步的雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，同時通過堿基互補(bǔ)配對原則將兩種生物條碼大量固定到磁珠上，以金片作為基底檢測拉曼信號，ATP的檢測限為5.6×10-9M，miRNA-203的檢測限為1.2×10-14M。本方案對于兩種分子具有較好的選擇性和靈敏度，為同時檢測多組份提供了可行的檢測方法

5、。
　　3、同時檢測多種重大疾病相關(guān)的生物活性分子，可提高疾病早期的檢出率。對于體內(nèi)濃度差異較大的多組分活性分子，高濃度的分子響應(yīng)信號易于掩蓋低濃度的分子響應(yīng)信號，影響低濃度分子檢測的準(zhǔn)確性。為進(jìn)一步提高體內(nèi)濃度水平差異較大的雙組份檢測的穩(wěn)定性和靈敏度，我們在上一部分的基礎(chǔ)上進(jìn)行了不對稱同時放大檢測，對于濃度較高的ATP使用生物條碼技術(shù)進(jìn)行一次信號放大，對于濃度較低的miR-203利用雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)反應(yīng)和生物條碼技術(shù)進(jìn)行二次信號放大