表面增強(qiáng)拉曼信號(hào)放大傳感分析方法在重大疾病相關(guān)活性分子檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、在重大疾病的診斷和治療中，蛋白質(zhì)和核酸通常被認(rèn)為是非常重要的生物標(biāo)志物和治療目標(biāo)物。然而在疾病早期，這些相關(guān)活性分子的濃度一般是很低的，因此，能夠獲得蛋白質(zhì)和核酸的高靈敏度檢測(cè)對(duì)于疾病的早期診斷和治療是非常重要的。本文結(jié)合表面增強(qiáng)拉曼光譜在生物分析領(lǐng)域中表現(xiàn)出的準(zhǔn)確、快速、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建靶替代循環(huán)、聚合酶鏈剪切循環(huán)和發(fā)夾DNA引發(fā)的循環(huán)放大方法，結(jié)合納米金生物條形碼技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)溶菌酶和PDGF等生物活性分子的靈敏度檢測(cè)。本論

2、文主要分為下面三個(gè)部分的內(nèi)容:
　　1、基于核酸適體的特異性識(shí)別功能和發(fā)夾DNA的結(jié)構(gòu)互變性質(zhì)，采用表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)技術(shù)，構(gòu)建了一種發(fā)夾型適體DNA循環(huán)放大SERS檢測(cè)溶菌酶的方法。本方法主要以發(fā)夾型適體DNA、聚合酶、內(nèi)切酶以及攜帶有拉曼信號(hào)分子的納米金生物條碼探針為原料，設(shè)計(jì)了雙重循環(huán)放大模式（即靶替代循環(huán)和聚合酶鏈取代循環(huán)），其放大效率得到顯著提高。在最佳的反應(yīng)條件下，該方法檢測(cè)溶菌酶的線性濃度范圍為1.0×10-14～

3、1.0×10-11 M，檢測(cè)限可達(dá)6.3 fM(3σ)，實(shí)現(xiàn)了溶菌酶的靈敏檢測(cè)。該方法操作簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，選擇性好，為表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)在生化分析中的應(yīng)用提供了一種新穎的思路和辦法。
　　2、為進(jìn)一步提高SERS信號(hào)放大的效率，在之前實(shí)驗(yàn)工作的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了一種基于三螺旋分子開(kāi)關(guān)的表面增強(qiáng)拉曼傳感級(jí)聯(lián)信號(hào)放大系統(tǒng)用于溶菌酶的檢測(cè)。該體系采用三螺旋分子作為溶菌酶的適體，設(shè)計(jì)了三重循環(huán)放大模式，包括靶替代循環(huán)、單鏈DNA引發(fā)的聚合剪

4、切替代循環(huán)和聚合酶鏈取代循環(huán)，進(jìn)一步提高了放大效率。在最佳反應(yīng)條件下，該方法的檢測(cè)限為0.54 fM(3σ)，比雙螺旋體系的檢測(cè)靈敏度提高了1個(gè)數(shù)量級(jí)。通過(guò)檢測(cè)實(shí)際樣品里的回收率，驗(yàn)證了該方法在實(shí)際樣品檢測(cè)中的有效性。該方法與其他檢測(cè)方法相比，具有選擇性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤標(biāo)志物或其他生化分析檢測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　3、利用核酸適體的結(jié)構(gòu)互變特性，結(jié)合聚合酶鏈取代放大反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)研制了一種基于發(fā)夾自產(chǎn)生的

5、雙重聚合酶鏈取代放大SERS檢測(cè)PDGF-BB的方法，該方法結(jié)合PDGF-BB適體的特殊結(jié)構(gòu)，當(dāng)適體結(jié)合目標(biāo)物后，可形成發(fā)夾DNA結(jié)構(gòu)，發(fā)夾DNA的一端以自身DNA鏈為模板，進(jìn)行聚合酶鏈取代反應(yīng)，釋放大量的單鏈DNA，用于引發(fā)進(jìn)一步的聚合酶鏈取代反應(yīng)，最后在金片基底上捕獲了大量的納米金生物條碼拉曼信號(hào)探針，從而提高檢測(cè)的靈敏度，其檢測(cè)限為5.8pM。該方法易于合成，具有較好的選擇性和靈敏性，為蛋白質(zhì)及其他重大疾病相關(guān)分子的檢測(cè)提供了新的