基于分子印跡納米生物探針和表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)的癌癥早期檢測(cè)方法研究.pdf

1、分子印跡技術(shù)所制備的分子印跡聚合物(MIP)集分離與富集為一體。由于其制備過程簡(jiǎn)單、原材料廉價(jià)、且穩(wěn)定性強(qiáng)、可以重復(fù)利用，是一種特異性強(qiáng)、靈敏度高、可實(shí)現(xiàn)高效快速分離純化的方法，所以在很多領(lǐng)域引起廣泛關(guān)注。表面增強(qiáng)拉曼光譜(SERS)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于蛋白類等生物樣品的無損傷、高效快速、高靈敏度的檢測(cè)。由于其檢測(cè)精度可達(dá)分子水平，所以還可用于細(xì)胞內(nèi)拉曼成像。在疾病的早期檢測(cè)尤其是用于癌癥早期診斷中具有很好的應(yīng)用前景，利于在復(fù)雜體系中對(duì)目標(biāo)

2、物的檢測(cè)。本論文制備了同時(shí)具有高度專一性和表面增強(qiáng)拉曼雙重效應(yīng)的分子印跡納米生物探針，用于蛋白類標(biāo)志物的分離和檢測(cè)，并用于了癌細(xì)胞的拉曼成像，實(shí)現(xiàn)了在復(fù)雜體系中對(duì)于目標(biāo)轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)及辣根過氧化物酶蛋白（HRP）的超靈敏性、無損傷、無需標(biāo)記的檢測(cè)，避免了傳統(tǒng)檢測(cè)方法的復(fù)雜、昂貴、耗時(shí)長(zhǎng)、檢測(cè)靈敏度低等缺點(diǎn)，在癌癥早期診斷方面具有重要意義。
　　本論文研究?jī)?nèi)容主要包含以下三個(gè)部分:
　　1、合成了不同長(zhǎng)徑比的納米金棒(GN

3、Rs)。并且研究了反應(yīng)物的加入量對(duì)于納米金棒長(zhǎng)徑比等性質(zhì)的影響。對(duì)納米金棒顆粒進(jìn)行了透射電子顯微鏡及紫外分光光度計(jì)表征;分別以轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)及人血清白蛋白(Hsa)為模板分子，以多巴胺為單體在納米金棒表面合成了超薄分子印跡聚合物層。且分別采用在溶液態(tài)、在玻璃板上及在油水界面形成薄層的方式進(jìn)行了拉曼測(cè)試，且該納米生物探針實(shí)現(xiàn)了在血清樣品中對(duì)于TRF的特異性捕獲及拉曼檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)10-8mol/L。研究了，不同長(zhǎng)徑比的納米金棒載體對(duì)

4、于目標(biāo)蛋白的檢測(cè)影響，及不同多巴胺層厚對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響。對(duì)目標(biāo)蛋白實(shí)現(xiàn)了超靈敏、無損傷和無需標(biāo)記的檢測(cè)。
　　2、制備了具有溫度響應(yīng)性及表面增強(qiáng)拉曼雙重效應(yīng)的分子印跡納米生物探針:通過RAFT反應(yīng)以N-異丙基丙烯酰胺為單體合成了具有溫度敏感性的聚(N-異丙基丙烯酰胺)聚合物，以辣根過氧化物酶（HRP）為模板分子，將聚(N-異丙基丙烯酰胺)嫁接在了納米金棒的表面，合成了具有溫度敏感性的分子印跡層，實(shí)現(xiàn)了對(duì)于HRP的溫度響應(yīng)型的特異

5、性捕獲及拉曼檢測(cè)，并對(duì)其溫敏性及選擇性進(jìn)行了研究。通過SERS對(duì)目標(biāo)蛋白HRP的檢測(cè)限可達(dá)10-14mol/L。
　　3、將溫度敏感型分子印跡納米生物探針導(dǎo)入癌細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)的拉曼成像。對(duì)HeLa細(xì)胞的研究結(jié)果證實(shí)，所制備納米生物探針在復(fù)雜的生物環(huán)境條件下，具有優(yōu)異的SERS信號(hào)強(qiáng)度和優(yōu)良的生物相容性，實(shí)現(xiàn)了很好的活細(xì)胞表面增強(qiáng)拉曼光譜成像。因此，該溫度敏感型納米生物探針在生物監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用潛力巨大，在今后的臨床診斷和醫(yī)學(xué)診斷治