Th-1型和Th-17型細(xì)胞因子在小鼠自身免疫性膽管炎和結(jié)腸炎中的作用.pdf

1、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)是一種慢性的自身免疫性肝臟疾病，主要以肝內(nèi)小膽管的慢性非化膿性破壞的膽管炎癥和血清中高滴度的抗線(xiàn)粒體抗體(AMA)為特征。肝內(nèi)小膽管的破壞可能由一系列的天然免疫應(yīng)答與體液和細(xì)胞的適應(yīng)性免疫應(yīng)答所介導(dǎo)，患者的肝臟匯管區(qū)可以檢測(cè)到自身反應(yīng)性的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)伴隨著NKT細(xì)胞，樹(shù)突狀細(xì)胞和其他專(zhuān)職的抗原提呈細(xì)胞等天然免疫細(xì)胞對(duì)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。與此同時(shí)，作為重要的免疫調(diào)控分子—細(xì)胞因子

2、在PBC的發(fā)病過(guò)程中也參與了機(jī)體免疫失衡的調(diào)控過(guò)程。PBC患者的血清和肝臟中的細(xì)胞因子分泌以Th1型占主導(dǎo)，存在高水平的Th1型細(xì)胞因子—IFN-γ的升高。同時(shí)，在PBC患者的匯管區(qū)也有Th17型細(xì)胞因子IL-17A陽(yáng)性細(xì)胞的浸潤(rùn)，但是Th1型與Th17型反應(yīng)在PBC的發(fā)病過(guò)程中所發(fā)揮的作用仍需要進(jìn)一步探索。
　　炎癥性腸病(IBD)是一種慢性復(fù)發(fā)性以胃腸道和上皮損傷為主要特征的自身免疫性疾病?？肆_恩病和潰瘍性結(jié)腸炎是兩種主要類(lèi)型

3、的IBD。典型的IBD患者會(huì)遭受著腹瀉、腹痛、直腸出血和營(yíng)養(yǎng)不良等影響日常生活質(zhì)量的癥狀。IBD的發(fā)病由遺傳因素和粘膜免疫應(yīng)答的功能異常所導(dǎo)致。研究報(bào)道細(xì)胞因子直接參與了IBD的發(fā)病過(guò)程。在克羅恩病患者體內(nèi)，細(xì)胞因子的特征傾向于Th1細(xì)胞。Th17細(xì)胞在腸道疾病中也發(fā)揮了重要的作用。而且全基因組學(xué)疾病相關(guān)性分析顯示細(xì)胞因子IL-12與克羅恩病相關(guān)。
　　由于臨床樣本研究的諸多局限性，研究者嘗試建立原發(fā)性膽汁性肝硬化的疾病動(dòng)物模型，

4、進(jìn)而探究PBC疾病進(jìn)程的相關(guān)因素。本研究組前期研究工作建立了IL-2Rα-/-小鼠模型，該小鼠自發(fā)膽管炎癥，從免疫學(xué)指標(biāo)和組織病理學(xué)指標(biāo)檢測(cè)均與人類(lèi)PBC類(lèi)似。而IL-2Rα-/-小鼠也是一個(gè)典型的克羅恩病的模型。之前的工作表明在IL-2Rα-/-小鼠中，CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)了肝臟膽管炎癥，而CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)了腸道炎癥。與此同時(shí)，IL-2Rα-/-的血清中可以檢測(cè)到高水平的Th1型細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子—IFN-γ，和Th17細(xì)胞典型的細(xì)胞

5、因子—IL-17A，而且IL-6和IL-12等炎性細(xì)胞因子的水平也升高。
　　本研究嘗試?yán)肐L-2Rα-/-小鼠探究IFN-γ和IL-17A在自身免疫性膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)病過(guò)程中的作用，主要工作可分為兩部分:
　　第一部分:在IL-2Rα-/-小鼠中，IFN-γ和IL-17A在膽管炎和結(jié)腸炎的作用。
　　1.IFN-γ的缺失不影響IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎和結(jié)腸炎。
　　我們將IFN-γ-/-小鼠與IL-

6、2Rα-/-小鼠進(jìn)行雜交，得到IFN-γ-/-IL-2Rα-/-小鼠，肝臟和腸道組織HE病理結(jié)果顯示，IFN-γ-/-IL-2Rα-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎之間沒(méi)有顯著性差異。肝臟單個(gè)核細(xì)胞的檢測(cè)與病理結(jié)果相一致，沒(méi)有顯著性改變。推測(cè)IFN-γ不參與IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥和結(jié)腸炎的發(fā)生。
　　2.IL-17A的缺失導(dǎo)致IL-2Rα-/-小鼠的膽管炎癥加重而結(jié)腸炎減輕。
　　我們首先將IL-

7、17A-/-小鼠與IL-2Rα-/-小鼠進(jìn)行雜交，對(duì)得到的IL-17A-/-IL-2Rα-/-雙缺陷小鼠進(jìn)行HE組織病理分析結(jié)果顯示，IL-17A缺失的IL-2Rα-/-小鼠門(mén)脈炎癥加重、小葉間炎癥加劇和膽管損傷程度加劇。對(duì)雙缺陷小鼠的細(xì)胞免疫學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞大量增多，其分泌IFN-γ的能力顯著提高。有趣的是IL-17A缺失后，IL-2Rα-/-小鼠的結(jié)腸炎癥減輕，而且其細(xì)胞免疫學(xué)特征顯示效應(yīng)/記憶性CD4+T細(xì)胞顯著減

8、少。
　　結(jié)論一:在IL-2Rα-/-小鼠中，IL-17A而非IFN-γ在自身免疫性膽管炎中發(fā)揮著一定的保護(hù)作用，但是IL-17A在腸道中卻行使著促進(jìn)炎癥的功能。因此臨床研究中，重組IL-17A抗體可能有潛力用于PBC的治療，但是對(duì)于IBD的治療時(shí)要慎重考慮。
　　第二部分:IL-12p40在IL-2Rα-/-小鼠腸道炎癥中的作用我們將IL-12p40-/-與IL-2Rα-/-小鼠進(jìn)行雜交，得到IL-12p40-/-IL-2

9、Rα-/-雙缺陷小鼠，對(duì)其腸道病理檢測(cè)的結(jié)果顯示IL-12p40缺失后，IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥得到緩解，細(xì)胞免疫學(xué)上顯示CD4+T細(xì)胞顯著減少，并且伴隨著IL-17A分泌的下調(diào)和IFN-γ分泌的上調(diào)。
　　結(jié)論二:在IL-2Rα-/-小鼠的腸道炎癥模型中，IL-12p40可能通過(guò)促進(jìn)Th17型反應(yīng)進(jìn)而促進(jìn)腸道炎癥的發(fā)生。同時(shí)，在IL-2Rα-/-小鼠中，可能存在著非IL-12的細(xì)胞因子調(diào)控著IFN-γ的表達(dá)。