線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在壓瘡中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：探討線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在大鼠壓瘡發(fā)生中的作用機(jī)制，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用及其介導(dǎo)凋亡的情況，進(jìn)一步了解壓瘡的病理機(jī)制，為有效預(yù)防及治療壓瘡提供新的靶點(diǎn)及依據(jù)。
　　方法：根據(jù)國(guó)內(nèi)姜麗萍等人研究的大鼠壓瘡模型建模。將40只雄性Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表方法分為5組，對(duì)照組（Control組后稱Con組）、受壓三個(gè)循環(huán)組（3circle組,后稱3C）、受壓六個(gè)循環(huán)組（6circle組,后稱6C組）、受壓九個(gè)循環(huán)組（9cir

2、cle組,后稱9C組）、受壓十二個(gè)循環(huán)（12circle組,后稱12C組），每組8只。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)脫頸法處死大鼠并取受壓肌肉組織進(jìn)行檢測(cè)。HE染色，光鏡觀察各組受壓組織的形態(tài)學(xué)變化；透射電鏡觀察各組受壓肌肉組織的超微結(jié)構(gòu)的變化；免疫印跡法（Western blot法）檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白78（GRP78）、半胱氨酸天門冬氨酸蛋白酶（caspase-12）的表達(dá)情況和線粒體相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)情況；免疫組織化學(xué)法觀察并分析GR

3、P78、caspase-12情況。數(shù)據(jù)采用SPSSl7.0系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ±s)進(jìn)行描述，組間差異性比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1 HE染色顯示與受壓組相比正常對(duì)照組，形態(tài)正常，肌纖維完整、排列整齊；隨著循環(huán)周期的延長(zhǎng)受壓組逐步出現(xiàn)退化的病理變化，表現(xiàn)為肌纖維排列紊亂出現(xiàn)少量的碎片，出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸加重，肌纖維出現(xiàn)溶解，斷裂，空泡

4、變性等病理改變。2透射電鏡顯示對(duì)照組肌纖維組織排列整齊緊密，間隙中可見(jiàn)形態(tài)正常且完整的線粒體；隨循環(huán)周期的延長(zhǎng)受壓組織骨骼肌細(xì)胞出現(xiàn)了廣泛的線粒體損傷，線粒體排列紊亂，嵴消失，水腫，或成空泡樣變性，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張明顯。3 Western blot顯示受壓各組GRP78表達(dá)均高于對(duì)照組且;而caspase-12與對(duì)照組相比只有6C、9C、12C時(shí)顯著升高，提示循環(huán)周期數(shù)的增多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷和其介導(dǎo)的凋亡越嚴(yán)重。同時(shí)，能夠反映細(xì)胞凋亡的Bcl-2/

5、Bax值顯示，與對(duì)照組相比3C組略有增高，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而6C、9C、12C組Bcl-2/Bax值顯著減小且呈遞減趨勢(shì)。4免疫組化結(jié)果顯示在各組中，GRP78的表達(dá)與Con組相比3C組，6C組，9C組和12C組的表達(dá)均明顯增加（P<0.05），但6C、9C、12C組的表達(dá)較3C組的表達(dá)有一定程度的降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而caspase-12蛋白的表達(dá)，與Con組比較3C組增加不顯著，（P<0.05）；6C組，9C組，1